[发明专利]启闭安神汤-孤独症核心作用基因靶点及其筛选方法

说明书

本发明公开了一种启闭安神汤‑孤独症核心作用基因靶点及其筛选方法，通过TCMSP和uniprot等数据库分析获得活性成分与疾病的交集靶点，然后构建蛋白质‑蛋白质相互作用(PPI)网络，应用Cytoscape软件对结果进行可视化分析PPI网络中的重要模块和核心靶点；在采用Metascape对靶点进行基因GO和KEGG通路富集分析，获得成分‑靶点‑基因功能‑通路‑疾病的可视化图形。本发明解决了多活性成分和多靶点蛋白之间相互作用的数量太大，难筛选的难题，对于指导中药复方的研发具有重要的应用意义。

技术领域

本发明涉及中药复方的药理研究，具体涉及启闭安神汤-孤独症核心作用基因靶点及其筛选方法。

背景技术

孤独症谱系障碍(autism spectrum disorder，ASD)是一种复杂的神经发育障碍性疾病，常发病于3岁之前，个体表型从轻度到重度差异较大。2020年，美国疾病控制与预防中心(CDC)发布的研究报告显示，孤独症儿童患病率已高达1:54，并且呈现逐年上升的趋势。然而，目前临床上依然缺乏针对孤独症明确的诊断、预防及治疗方案。因此，探索孤独症的发病机制，寻求切实有效的治疗策略，开发新颖实效的治疗药物，对孤独症的治疗具有重要的研究价值与临床意义。

启闭安神汤是常用方剂，临床资料表明其效果显著，能明显改善“心肝火旺证”孤独症患儿的症状。但启闭安神汤的具体有效活性成分及药理作用机制尚不清楚。此汤剂的主要成分为远志、石菖蒲、五味子、黄连、莲子心和肉桂，全方达到清心平肝，安神定志的功效，属于中医心肝火旺证治疗范畴。

网络药理学是近年发展起来的一种可用于筛选候选基因或靶点来研究相关疾病功能和药物治疗机制的应用工具，提供了全新的“多药物，多靶点”互作关系的药物开发新模式和新思路。

发明内容

本发明解决的问题在于提供启闭安神汤-孤独症核心作用基因靶点及其筛选方法。

本发明技术方案包括以下步骤：

启闭安神汤-孤独症核心作用基因靶点，包括以下基因：

VEGFA、IL6、TNF、INS、PTGS2、CXCL8、AKT1、MMP9、TP53和EGF。

所述的启闭安神汤-孤独症核心作用基因靶点在制备或筛选治疗孤独症中的应用。

以下作用成分作为优选对象筛选：槲皮素、山柰酚、毛地黄黄酮、4’-甲基衡州悟乌药碱、S-(2-羧乙基)-L-半胱氨酸和油酸。.

一种启闭安神汤-孤独症核心作用基因靶点的筛选方法，包括以下操作：

1)筛选启闭安神汤全组份的活性成分；

2)筛选启闭安神汤活性成分的作用靶点，并将靶点进行归一化和标准化命名，得到启闭安神汤活性成分的潜在靶点；

3)在疾病靶标数据库，筛选孤独症疾病靶点；

将启闭安神汤活性成分的潜在靶点与孤独症疾病靶点的交集基因，作为启闭安神汤治疗孤独症的候选靶点；

4)构建启闭安神汤活性成分-疾病靶点网络：将启闭安神汤活性成分的作用靶点对应启闭安神汤治疗孤独症的候选靶点建立网络图；

5)GO功能注释和KEGG通路富集分析：对交集基因进行基因功能注释和KEGG通路富集分析，确定潜在靶点相关的生物学功能；

基于KEGG通路富集结果和交集靶点基因信息构建靶点-通路”富集网络，提示启闭安神汤对AGE-RAGE信号通路、钙信号通路和多巴胺能神经突触与孤独症相关；

6)构建蛋白质-蛋白质相互作用PPI网络：将交集靶基因上传到String数据库，选择多种蛋白质、智人和置信度选项，获取交集靶点基因的蛋白质-蛋白质相互作用PPI网络数据，并对结果进行可视化分析；