[发明专利]启闭安神汤-孤独症核心作用基因靶点及其筛选方法

权利要求书

1.启闭安神汤-孤独症核心作用基因靶点，其特征在于，包括以下基因：

VEGFA、IL6、TNF、INS、PTGS2、CXCL8、AKT1、MMP9、TP53和EGF。

2.权利要求1所述的启闭安神汤-孤独症核心作用基因靶点在制备或筛选治疗孤独症中的应用。

3.如对权利要求2所述的应用，其特征在于，以下作用成分作为优选对象筛选：槲皮素、山柰酚、毛地黄黄酮、4’-甲基衡州悟乌药碱、S-(2-羧乙基)-L-半胱氨酸和油酸。.

4.一种启闭安神汤-孤独症核心作用基因靶点的筛选方法，其特征在于，包括以下操作：

1)筛选启闭安神汤全组份的活性成分；

2)筛选启闭安神汤活性成分的作用靶点，并将靶点进行归一化和标准化命名，得到启闭安神汤活性成分的潜在靶点；

3)在疾病靶标数据库，筛选孤独症疾病靶点；

将启闭安神汤活性成分的潜在靶点与孤独症疾病靶点的交集基因，作为启闭安神汤治疗孤独症的候选靶点；

4)构建启闭安神汤活性成分-疾病靶点网络：将启闭安神汤活性成分的作用靶点对应启闭安神汤治疗孤独症的候选靶点建立网络图；

5)GO功能注释和KEGG通路富集分析：对交集基因进行基因功能注释和KEGG通路富集分析，确定潜在靶点相关的生物学功能；

基于KEGG通路富集结果和交集靶点基因信息构建靶点-通路”富集网络，提示启闭安神汤对AGE-RAGE信号通路、钙信号通路和多巴胺能神经突触与孤独症相关；

6)构建蛋白质-蛋白质相互作用PPI网络：将交集靶基因上传到String数据库，选择多种蛋白质、智人和置信度选项，获取交集靶点基因的蛋白质-蛋白质相互作用PPI网络数据，并对结果进行可视化分析；

7)核心基因以及关键化合物筛选与评价：利用MCC方法确定了前10个核心基因，并对核心基因进行了GO和KEGG通路分。

5.如权利要求4所述的启闭安神汤-孤独症核心作用基因靶点的筛选方法，其特征在于，具体包括以下操作：

1)根据中药系统药理学分析数据库和BATMAN-TCM数据库在线平台，以生物口服利用度≥30％、类药性指数≥0.1作为条件，筛选数据库中启闭安神汤全组份的活性成分；

2)运用TCMSP在线数据库筛选启闭安神汤活性成分的作用靶点，并将靶点数据通过UniProt数据库，进行归一化和标准化命名；得到启闭安神汤六味药材活性成分的潜在靶点336个；

3)在疾病靶标数据库，检索筛选疾病靶点基因作为该病候选靶点；

将启闭安神汤活性成分的潜在靶点和疾病靶点的交集基因，作为启闭安神汤治疗孤独症的候选靶点；

4)构建启闭安神汤活性成分-疾病靶点网络：将启闭安神汤活性成分的作用靶点对应启闭安神汤治疗孤独症的候选靶点建立网络图，使用Cytoscape 3.8.2软件系统分析计算出连接数，根据degree值筛选出前六种成分；

5)GO功能注释和KEGG通路富集分析：通过metascape在线数据库对交集基因进行基因功能注释和KEGG通路富集分析，确定潜在靶点相关的生物学功能；然后将KEGG通路富集结果和交集靶点基因信息导入Cytoscape 3.8.2软件中，构建靶点-通路富集网络，实现富集分析结果的可视化；

6)构建蛋白质-蛋白质相互作用PPI网络：将获得的交集靶基因上传到String数据库，选择多种蛋白质、智人和置信度0.9选项，获取交集靶点基因的蛋白质-蛋白质相互作用PPI网络数据，并利用Cytoscape3.8.2软件对结果进行可视化分析；

7)核心基因以及关键化合物筛选与评价：利用Cytoscape3.8.2软件的“cytoHubba”插件中的MCC方法确定了前10个核心基因，通过metascape数据库对核心基因进行了GO和KEGG通路分析。

6.如权利要求5所述的启闭安神汤-孤独症核心作用基因靶点的筛选方法，其特征在于，所述的前六种成分为：槲皮素、山柰酚、毛地黄黄酮、4’-甲基衡州悟乌药碱、S-(2-羧乙基)-L-半胱氨酸和油酸。

7.如权利要求5所述的启闭安神汤-孤独症核心作用基因靶点的筛选方法，其特征在于，所述的前10个核心基因包括VEGFA、IL6、TNF、INS、PTGS2、CXCL8、AKT1、MMP9、TP53和EGF。