[发明专利]一种快速筛选抗蔷薇长管蚜月季种质资源的方法

说明书

一种快速筛选抗蔷薇长管蚜月季种质资源的方法，该方法包括抗蚜标记专用引物RhWRKY14，蔷薇长管蚜的接种，荧光定量RTFQ‑PCR试验，以及抗蚜材料的等级划分。该方法仅用1天时间和少量植物材料，即可准确高效地在我国各地鉴定出对蔷薇长管蚜具有抗虫性的月季种质资源，节约成本、省工省时。

技术领域

本发明属木本花卉抗虫育种技术领域，具体涉及不同月季种质资源对蔷薇长管蚜的抗性鉴定和筛选。

背景技术

月季(Rosa hybrida)是蔷薇科(Rosaceae)蔷薇属(Rosa L.)植物，栽培广泛，是全球第一大切花。在我国，云南省是月季切花的主产区之一。

危害月季的蚜虫主要包括蔷薇长管蚜(Macrosiphum rosae)、月季长管蚜(Macrosiphum rosivorum)、桃蚜(Myzuspe rsicae)、月季冠蚜(Myzaphis rosarum)、棉蚜(Aphis gossypii)等，其中蔷薇长管蚜最为常见且危害严重，其常聚集于月季嫩梢部位刺吸汁液，进而使花卉长势衰弱，同时增加其他病虫害的感染率。随着切花月季生产规模的不断扩大，蚜虫对月季的危害日渐严重，目前，主要是采用施用农药对其进行防治，但这样不仅增加了生产商的生产成本，而且对环境造成了污染。因此，选育和种植抗蚜月季新品种是今后绿色生产的关键。

选育月季抗蚜新品种的前提，就是要应用准确高效的抗蚜鉴定和筛选方法，对大量的月季亲本材料和大量的月季杂交后代，进行抗蚜鉴定和筛选工作，以期缩短抗蚜育种的周期。迄今为止，国内外尚未有利用分子标记技术筛选抗蚜月季种质资源的研究报道。目前，国内外对于抗蚜植物的传统筛选鉴定方法主要是：将蚜虫接种到鉴别寄主植物上，经过一定产蚜周期，记录和统计寄主叶片上产蚜数量变化情况，以此鉴别出不同抗蚜等级的植物材料。

基于我们前期对月季蔷薇长管蚜对月季资源各个阶段的危害特点、月季抗蚜基因的克隆和测序、月季抗蚜基因分子标记开发等多方面开展了大量的科研工作，发现结合现代分子生物技术对抗蚜材料进行鉴定筛选，不仅能准确地鉴定和筛选出抗蚜材料，而且能缩短鉴定周期，同时还具有操作方便、省工省材等优点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能够快速筛选抗蔷薇长管蚜的月季种质资源的方法，以便解决目前抗蚜植物的传统筛选鉴定方法存在的费事费力和鉴别不精准的缺陷。

本文本以下所使用的术语：

抗蚜：抗蔷薇长管蚜。

蚜虫：蔷薇长管蚜。

荧光定量RTFQ-PCR技术：实时荧光定量聚合酶链反应，英文Real-TimeFluorescence Quantitative Polymerase Chain Reaction，简称：RTFQ-PCR。

UBC基因：泛素结合蛋白(UBiquitin Conjugating protein)基因。

RhWRKY14基因：月季七肽(WRKYGQK)保守转录因子基因(Rosa hybrida probableWRKY transcription factor 40Locus Chromosome 2，RhWRKY14)

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

1.一种利用荧光定量RTFQ-PCR技术快速筛选抗蔷薇长管蚜月季种质资源的专用引物RhWRKY14，所述专用引物RhWRKY14由RhWRKY14上游引物和RhWRKY14下游引物组成，所述RhWRKY14上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，RhWRKY14下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。