[发明专利]醋酸曲普瑞林的纯化方法

权利要求书

1.一种醋酸曲普瑞林的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

a、将曲普瑞林粗肽用溶剂溶解，过滤得滤液；

b、将步骤a所得滤液加载到以反相聚合物为固定相的色谱柱进行一次分离纯化，收集主峰样品1；其中，流动相A为0.15-0.40 wt%磷酸二氢钠水溶液，pH2.0-3.0；流动相B为乙腈，B相的洗脱梯度为20-40 v/v%，洗脱时间50-70 min；

c、将主峰样品1加载到以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱进行二次分离纯化，收集主峰样品2；其中，流动相A为0.1-0.15 v/v%三氟乙酸水溶液，pH2.0-3.0；流动相B为乙腈；B相的洗脱梯度为20-25 v/v%，洗脱时间50-70 min；

d、将主峰样品2经过PGMA-PEI-GTA阴离子交换介质进行洗脱转盐，收集主峰样品3，经冷冻干燥得到醋酸曲普瑞林纯品；其中，流动相为0.01-0.05 v/v%醋酸水溶液；所述阴离子交换介质的基质为PGMA-EDMA，采用原子自由基悬浮聚合法制备，制备过程中所配制的水相中还包括三醋酸甘油酯和吡哆醇；所述水相中三醋酸甘油酯的含量为0.0005-0.001 g/mL；所述三醋酸甘油酯与吡哆醇的质量比为7.4-10∶1；

基质PGMA-EDMA的制备步骤包括：将PVA、三醋酸甘油酯、吡哆醇、SDS溶解于去离子水中配成水相；将单体GMA、交联剂EDMA、致孔剂、CuBr和BPY混合，最后加入EPB，对溶液充分搅拌，组成油相；在机械搅拌的条件下，边向水相中通N₂排除O₂边将配制的油相缓缓加入，升高温度至38-60℃，反应6-10 h，用去离子水和乙醇分别洗涤2-4次，自然风干，制得PGMA-EDMA微球；所述水相中含有0.03g/mL PVA；所述GMA与致孔剂的体积比为1∶1-3；所述致孔剂包括二氯甲烷和正辛醇，且二氯甲烷和正辛醇的体积比为1∶1-3；所述GMA与EDMA的体积比为1-1.8∶1；

所述PGMA-PEI-GTA阴离子交换介质的制备方法包括：取PGMA-EDMA微球4.2-5.0 g，加入40-60 mL二氧六环溶液，加入8-12 g PEI液体，在58-62℃水浴条件下振荡反应18-26 h，转速120-140 rpm，反应结束后冷却至18-28℃，然后用蒸馏水洗涤3-5次，得到PGMA-PEI微球；向PGMA-PEI微球中，加入4-6 g GTA，再加入50-80 mL 0.1 M NaOH，在58-62℃水浴条件下振荡反应18-26 h，转速120-140 rpm，反应结束后，蒸馏水洗涤3-5次。

2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于：所述步骤a所用溶剂为5-10 v/v%乙腈水溶液。

3.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于：所述曲普瑞林粗肽采用固相逐步合成法或固相片段缩合法或液相合成法制得。

4.根据权利要求2所述的纯化方法，其特征在于：所述步骤a中溶剂按照0.08-0.12 g/mL的浓度溶解曲普瑞林粗肽。

5.一种醋酸曲普瑞林的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、采用固相逐步合成法制得曲普瑞林粗品；

S2、采用权利要求1-4任一项中所述的纯化方法对曲普瑞林粗品纯化，得到醋酸曲普瑞林。