[发明专利]醋酸曲普瑞林的纯化方法

说明书

本发明提供醋酸曲普瑞林的纯化方法，属于药物化学领域，包括将曲普瑞林粗肽溶液加载到以反相聚合物为固定相的色谱柱进行一次分离纯化，收集主峰样品1，加载到以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱进行二次分离纯化，收集主峰样品2，经过自制PGMA‑PEI‑GTA阴离子交换介质进行洗脱转盐，收集主峰样品3，经冷冻干燥得到醋酸曲普瑞林纯品；PGMA‑PEI‑GTA的基质为PGMA‑EDMA，在制备PGMA‑EDMA时，在水相中加入三醋酸甘油酯和吡哆醇。本发明提供的醋酸曲普瑞林的纯化方法具有成本较低，生产周期较短，收率较高的优点。

技术领域

本发明属于药物化学领域，具体涉及醋酸曲普瑞林的纯化方法。

背景技术

曲普瑞林，分子式C₆₄H₈₂N₁₈O₁₃，分子量1311.45，英文名：Triptorelin，商品名为色氨瑞林、达必佳、Decapeptyl等。曲普瑞林，以其醋酸盐或者巴莫酸盐的形式应用于临床，临床适应症包括前列腺癌、性早熟、辅助生殖技术，例如体外授精术、子宫内膜异位症和子宫肌瘤等。曲普瑞林是一种促性腺激素释放激素（GnRH）的类似物，主要作用于垂体前叶，大剂量应用初期可以引起一过性黄体生成素（LH）和卵泡雌激素（FSH）释放增多，后期则导致垂体敏感性降低，使LH、FSH和性激素分泌减少。

现有技术如授权公告号为CN 103012564 B的中国发明专利，公开了一种高纯度的曲普瑞林及其纯化方法。该高纯度的曲普瑞林经氨基酸光学纯检测，7个氨基酸的D-型对映体比例相对于其相应氨基酸小于0.2%；D-Arg相对于全部精氨酸小于0.2%；乙腈含量低于0.03%；甘氨酸、组氨酸、精氨酸、酪氨酸、亮氨酸、脯氨酸、谷氨酸及丝氨酸经氨基酸组成检测，各氨基酸的相对比值在0.9-1.1之间。纯化方法包括步骤：（a）将待纯化的曲普瑞林用溶剂溶解，过滤得滤液；（b）将步骤（a）所得滤液加载到离子交换柱上，用流动相洗脱并使曲普瑞林转化成其盐，收集主峰流出液；（c）将步骤（b）所得流出液加载到硅胶柱上，用流动相洗脱，收集主峰洗脱液，除去溶剂，即得。该发明方法收率高，产品质量稳定，生产成本低，操作简单，适合大生产。为控制曲普瑞林原料杂质限量，提高纯度及收率，需要进一步研究分离纯化方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种醋酸曲普瑞林的纯化方法，该方法能够提高PGMA-PEI-GTA的动态载量，提高醋酸曲普瑞林的纯化收率和总收率，降低生产成本，缩短生产周期。

本发明为实现上述目的所采取的技术方案为：

提供一种醋酸曲普瑞林的纯化方法，包括以下步骤：

a、将曲普瑞林粗肽用溶剂溶解，过滤得滤液；

b、将步骤a所得滤液加载到以反相聚合物为固定相的色谱柱进行一次分离纯化，收集主峰样品1；其中，流动相A为0.15-0.40 wt%磷酸二氢钠水溶液，pH2.0-3.0；流动相B为乙腈，B相的洗脱梯度为20-40 v/v%，洗脱时间50-70 min；

c、将主峰样品1加载到以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱进行二次分离纯化，收集主峰样品2；其中，流动相A为0.1-0.15 v/v%三氟乙酸水溶液，pH2.0-3.0；流动相B为乙腈；B相的洗脱梯度为20-25 v/v%，洗脱时间50-70 min；