[发明专利]一种评价禽源沙门氏菌对含氯消毒剂与抗生素产生交叉耐药的方法

说明书

本发明公开了一种评价禽源沙门氏菌对含氯消毒剂与抗生素产生交叉耐药的方法，包括如下步骤：步骤1，菌悬液制备；步骤2，氯消毒剂配制；步骤3：氯抗性的测定；步骤4：抗生素的耐药测定；步骤5：交叉耐药的评价。本发明提供的一种评价禽源沙门氏菌对含氯消毒剂与抗生素产生交叉耐药的方法，通过测定在1/2MIC_质控株的消毒剂浓度处理下的菌株OD₆₀₀值来判断氯抗性，测定细菌抗生素MIC值来判断抗生素抗性，并通过比较氯抗性(OD₆₀₀值)和抗生素抗性(MIC值)之间的相关性，来判断具体哪几种抗生素会对氯抗性沙门氏菌产生交叉耐药，为提高禽类的食用安全性保驾护航。

技术领域

本发明属于微生物耐药性研究技术领域，具体涉及一种评价禽源沙门氏菌对含氯消毒剂与抗生素产生交叉耐药的方法。

背景技术

氯消毒是工业加工中控制微生物风险的最常见消毒技术之一。一些细菌在亚致死消毒剂浓度处理下的存活和繁殖，被命名为“耐氯细菌”。近年来，国内外对饮用水中细菌的耐氯性研究较多，而对家禽中食源性致病菌的耐氯性研究较少。在我国，家禽冷却水中通常使用 50～100mg/L的次氯酸钠(NaClO)，而这只能有限灭活鸡肉中的沙门氏菌(1log)，可能是因为沙门氏菌对NaClO的耐受性。

近年来，研究表明，由于在动物养殖过程中长期使用抗生素，抗生素耐药性显著增加。家禽经常携带具有耐药性的沙门氏菌菌株，这种菌株可以通过食物链传播给人类。喹诺酮类、四环素类和超广谱耐β内酰胺类沙门氏菌等抗生素耐药性的出现引发了严重的公共卫生问题。消毒剂(例如苯扎氯铵、洗必泰、三氯生)和抗生素之间的交叉抗药性在细菌病原体中是臭名昭著的，并成为一个特别令人担忧的问题。研究发现耐药大肠杆菌对NaClO的耐受性更高。细菌暴露于氯会增加外排泵的表达，激活对氯霉素、磺胺和β-内酰胺类抗生素产生耐药性的基因。到目前为止，家禽供应链中分离的沙门氏菌对NaClO的耐受性以及对抗生素的交叉耐药性还不完全清楚。

目前，关于禽源沙门氏菌的专利文献，多集中于PCR检测的方法，如名称为“一种鉴定禽源沙门氏菌的多重PCR检测试剂盒及其方法”(公开号为CN104774969A)的中国发明专利，公开了一种鉴定禽源沙门氏菌的多重PCR检测试剂盒，该多重PCR检测试剂盒包括PCR缓冲液、脱氧核糖核苷三磷酸混合物、Taq DNA聚合酶以及bcf基因、heli基因、rhs基因、sdf基因、fla基因的引物对；还公开了一种应用所述试剂盒鉴定禽源沙门氏菌的多重PCR检测方法，用于鉴别家禽生产或者家禽产品中流行的不同沙门氏菌血清型。又如名称为“一种禽源沙门氏菌多重PCR检测试剂盒及其非诊断性检测方法”(公开号为CN105648055A)的中国发明专利，公开了一种禽源沙门氏菌多重PCR检测试剂盒及其非诊断性检测方法，该试剂盒包括10×PCR缓冲液、2.5U/μl Taq DNA聚合酶、10Mm dNTPs、多重PCR检测引物组、阳性对照和阴性对照，阳性对照物包括肠炎沙门氏菌ATCC13076、鼠伤寒沙门氏菌 ATCC14028、鸡伤寒沙门氏菌ATCC9184基因组DNA；阴性对照为灭菌双蒸水；还公开了一种应用所述试剂盒检测禽源沙门氏菌的多重PCR方法。

尚未有专利文献报道如何评价禽源沙门氏菌对含氯消毒剂与抗生素产生交叉耐药的，以便于提高禽类的食用安全性。

综上所述，提供一种评价禽源沙门氏菌对含氯消毒剂与抗生素产生交叉耐药的方法，是本领域技术人员尚未解决的技术难题。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于提供一种评价禽源沙门氏菌对含氯消毒剂与抗生素产生交叉耐药的方法，通过测定消毒剂最低抑菌浓度(MIC)下的吸光度(OD)，及测定细菌抗生素MIC值，来评价禽源沙门氏菌NaClO与抗生素间的交叉耐药性。

为解决前述技术问题，本发明采用的技术方案具体如下：

一种评价禽源沙门氏菌对含氯消毒剂与抗生素产生交叉耐药的方法，包括如下步骤：