[发明专利]具有抑制胰脂肪酶活性的N6-乙酸乙酯基-5’-乙酰基-β-核糖腺苷及制备方法

说明书

本发明涉及一种具有抑制胰脂肪酶活性的N⁶‑乙酸乙酯基‑5’‑乙酯基‑β‑核糖腺苷及制备方法，属于生物制品的提取制备技术领域。N⁶‑乙酸乙酯基‑5’‑乙酯基‑β‑核糖腺苷为黄色油状物质，经一维和二维核磁共振、精确质谱鉴定分别得到N⁶‑乙酸乙酯基‑5’‑乙酯基‑β‑核糖腺苷结构式。本发明通过培养蝉花真菌，然后提取分离得到所需的化合物。本发明制备的N⁶‑乙酸乙酯基‑5’‑乙酯基‑β‑核糖腺苷可用于制备胰脂肪酶抑制剂，对治疗肥胖具有潜力作用，同时还可能对糖尿病有潜在作用。本发明的制备方法采取微生物发酵生产，环境友好，不受自然环境和资源影响，易实现工业化、自动化、连续化生产。

技术领域

本发明属于生物制品的提取制备技术领域，具体涉及具有抑制胰脂肪酶酶活性的N⁶-乙酸乙酯基-5’-乙酰基-β-核糖腺苷及其提取、纯化、结构鉴定和活性测定。

背景技术

N⁶-乙酸乙酯基-5^’-乙酰基-β-核糖腺苷是从一种蝉花真菌(Cordyceps chanhua)培养物中分离制备得到的具有胰脂肪酶酶抑制活性的新型生物活性物质。

蝉花真菌(Cordyceps chanhua)为麦角菌科(Clavicipitaceae)、虫草属(Cordyceps)的真菌，有多个同物异名：蝉虫草(Cordyceps cicadae),辛克莱蝉花(Cordyceps sinclairii),辛克莱棒束孢(Isaria sinclairii),蝉拟青霉(Paecilomycescicadae)和蝉棒束孢(Isaria cicadae)。是蝉花真菌感染昆虫后形成的虫草复合体，并作为冬虫夏草的代用品，具有重要经济价值。

抑制胰脂肪酶活性：胰脂肪酶是消化系统中吸收脂肪最重要的酶，在吸收过程中起关键作用。具有抑制胰脂肪酶活性的生物活性物质可通过抑制胰脂肪酶活性而抑制脂肪的吸收，因而可用来预防和治疗肥胖等，在医药领域有着广阔的应用前景。

发明内容

为寻找新型天然高效的具有胰脂肪酶抑制活性的物质，发明人通过蝉花RECF5833菌株代谢物进行活性研究，发现了蝉花真菌培养物中提取的新化合物N⁶-乙酸乙酯基-5^’-乙酰基-β-核糖腺苷具有明显的抑制胰脂肪酶活性的作用。

一种具有抑制胰脂肪酶活性的N⁶-乙酸乙酯基-5’-乙酯基-β-核糖腺苷是从蝉花(Cordyceps chanhua)培养物中分离制备得到的，其结构式如下：

所述N⁶-乙酸乙酯基-5’-乙酯基-β-核糖腺苷为黄色油状，分子式为C₁₆H₂₁N₅O₇；对胰脂肪酶的半数抑制浓度(IC₅₀)为：0.374mg/mL。

一种具有胰脂肪酶抑制活性的N⁶-乙酸乙酯基-5’-乙酯基-β-核糖腺苷在制备具有胰脂肪酶抑制活性的保健品中的应用。

一种具有抑制胰脂肪酶活性的N⁶-乙酸乙酯基-5’-乙酯基-β-核糖腺苷的制备操作步骤如下：

所用蝉花菌株的国际菌库号：WDCM1031；

(1)制备固体培养物

(1.1)斜面种子培养

将蝉花菌株水液原种接种于萨氏(SDAY)固体平板培养基，每个培养皿接种100～300μL蝉花菌株水液原种，于22～29℃恒温、培养8～16d，得到一级菌种；

萨氏(SDAY)固体平板培养基的配方为葡萄糖40g、蛋白胨10g、酵母浸出粉10g和琼脂20g，加水定容至1000mL；