[发明专利]具有抑制胰脂肪酶活性的N6-乙酸乙酯基-5’-乙酰基-β-核糖腺苷及制备方法

权利要求书

1.一种具有抑制胰脂肪酶活性的N⁶-乙酸乙酯基-5’-乙酯基-β-核糖腺苷，其特征在于：

是从蝉花(Cordyceps chanhua)培养物中分离制备得到的，其结构式如下：

所述N⁶-乙酸乙酯基-5’-乙酯基-β-核糖腺苷为黄色油状，分子式为C₁₆H₂₁N₅O₇；对胰脂肪酶的半数抑制浓度(IC₅₀)为：0.374mg/mL。

2.根据权利要求1所述的一种具有胰脂肪酶抑制活性的N⁶-乙酸乙酯基-5’-乙酯基-β-核糖腺苷的用途，其特征在于：所述的N⁶-乙酸乙酯基-5’-乙酯基-β-核糖腺苷在制备具有抑制胰脂肪酶活性的保健品中的应用。

3.根据权利要求1所述的具有抑制胰脂肪酶活性的N⁶-乙酸乙酯基-5’-乙酯基-β-核糖腺苷的制备方法，其特征在于操作步骤如下：

所用蝉花菌株的国际菌库号：WDCM1031；

(1)制备固体培养物

(1.1)斜面种子培养

将蝉花菌株水液原种接种于萨氏(SDAY)固体平板培养基，每个培养皿接种100～300μL蝉花菌株水液原种，于22～29℃恒温、培养8～16d，得到一级菌种；

萨氏(SDAY)固体平板培养基的配方为葡萄糖40g、蛋白胨10g、酵母浸出粉10g和琼脂20g，加水定容至1000mL；

(1.2)二级液体种子培养

将一级菌种的菌块按0.5～2cm²/100mL打散接种至液体摇瓶培养基中培养；

液体摇瓶培养基：葡萄糖30～50g/L、蛋白胨8～12g/L、酵母浸出粉8～12g/L，蒸馏水定容；

在大于等于100mL三角瓶中加入30～50％三角瓶体积的液体培养基，每个三角瓶接种0.5～2cm²/100mL固体平板菌块，恒温振荡培养，温度22～29℃、转速180～240rpm，培养3～5d，即得到二级液体菌种；

(1.3)固体培养

将二级液体种子接种到萨氏(SDAY)固体培养基上，接种量为每个培养皿接种150～300μL二级液体种子，涂布均匀，放入22～29℃恒温培养箱培养4～8天，收集菌丝，得到固体培养物；

(2)制备N⁶-乙酸乙酯基-5’-乙酯基-β-核糖腺苷

(2.1)固体培养物中有效成分的提取

用乙酸乙酯提取剂对固体培养物进行超声提取、滤膜过滤或离心分离、真空减压去除溶剂，得到有效成分提取物；

(2.2)有效成分提取物初步纯化

采用半制备型反相高效液相色谱对提取物进行初步纯化，得到黄棕色固体初步纯化物；

(2.3)初步纯化物的精制

采用半制备型反相高效液相色谱对黄棕色初步纯化物进行精制，在乙腈溶液洗脱条件下，收集第一个最高峰值对应的化合物，得到N⁶-乙酸乙酯基-5’-乙酯基-β-核糖腺苷洗脱液，真空减压去除溶剂，干燥，得到黄色油状的N⁶-乙酸乙酯基-5’-乙酯基-β-核糖腺苷。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：步骤(2.1)中，将固体培养物在温度-50～130℃条件下干燥，按重量体积比1g：0.5～5mL在固体培养物中加入乙酸乙酯提取剂，40KHz超声提取20～200分钟；经0.20～2.5μm滤膜过滤或4000～15000转/分钟条件下离心，得滤液或离心上清；滤液或离心上清在真空度-0.1～-0.08MP、温度10～60℃条件下减压蒸去提取剂，得到有效成分提取物。