[发明专利]稳定化的疫苗组合物

说明书

本发明涉及疫苗组合物，该疫苗组合物包含免疫有效量的病毒融合蛋白抗原，诸如RSV融合前F蛋白，和稳定量的抗病毒化合物，并且涉及用于制备此类疫苗组合物的方法。

技术领域

本发明涉及医学领域。本发明尤其涉及稳定化的疫苗组合物，尤其是包含重组融合前I类融合蛋白的稳定疫苗组合物，及其用途。

背景技术

包膜病毒，诸如呼吸道合胞病毒(RSV)或流感病毒，通过诱导病毒膜和细胞膜的融合进入细胞，这一过程由在它们的表面表达的专用膜融合蛋白催化。融合糖蛋白以不稳定(亚稳态)形式存在于感染性病毒粒子的表面，并且是动态融合机器，其通过从所述亚稳态融合前构象到稳定融合后构象的不可逆蛋白质重折叠来驱动膜融合。

包膜病毒的融合蛋白可以根据其显示的用以驱动病毒与靶细胞融合的一般不可逆折叠机制而分类为不同类型。来自无关病毒的融合蛋白(诸如，来自副粘病毒科的融合(F)蛋白、逆转录病毒包膜蛋白、冠状病毒科刺突蛋白和正粘病毒科血凝素(HA)蛋白等被分类为I类融合蛋白，并且通过类似的机制从不稳定的融合前状态重折叠成稳定的融合后状态，尽管它们不显示任何显著的序列同源性。已经确定了呈融合前构象和融合后构象的多种I类融合蛋白的结构，从而提供了对这种复杂融合机器机制的了解。

这些结构研究还表明，与不稳定的野生型蛋白呈现相同抗原位点的稳定I类融合蛋白有效引发强效中和抗体，因此适合用作疫苗中的抗原。当使用病毒融合蛋白作为疫苗中的免疫原时，它们的融合功能并不重要。然而，免疫原对天然病毒表面蛋白的拟态对于确保该疫苗诱导可以结合该病毒的交叉反应性抗体是重要的。实际上，蛋白疫苗的免疫原性(在很大程度上)取决于关键蛋白抗原的结构完整性，尤其是与构象表位相关(其中，抗体需要结合通过天然折叠聚集在一起的多肽链的不同区域)。因此，不可逆的构象变化和不可逆的聚集会导致疫苗的效力降低。因此，为了将所述I类融合蛋白开发成为稳健有效的疫苗免疫原，期望将这些亚稳态融合蛋白稳定地维持为其融合前构象。

然而，许多蛋白疫苗对热不稳定，或(长期)在4℃下储存或冻融不稳定，因此它们在储存时会失去效力。(热)稳定性的提高可以解决例如在偏远和贫困地区可能面临的冷链问题，并且延长疫苗的保质期。因此需要生产具有增加的(热)稳定性和/或增加的保质期的稳定疫苗组合物。

发明内容

本发明涉及包含病毒融合蛋白(诸如，I类融合蛋白)作为抗原的疫苗组合物，该疫苗组合物具有改进的(热)稳定性。本发明的疫苗组合物可在冷冻或冷藏条件下长时间储存，且适合用于临床和商业制造。本发明还涉及制备稳定化的疫苗组合物的方法。

在第一方面，本发明涉及疫苗组合物，这些疫苗组合物包含免疫有效量的病毒融合蛋白抗原，尤其是融合前I类融合蛋白，和稳定量的抗病毒化合物。

与先前披露的组合物相比，本发明的疫苗组合物具有改进的热稳定性，以及针对搅动应力、热应力(例如，冻融应力)、pH波动引起的应力以及因此延长的保质期的改进的稳定性。

根据本发明，令人惊讶地是，已经显示，通过向所述疫苗组合物中添加稳定量的抗病毒化合物(诸如，小分子融合抑制剂或病毒进入抑制剂)，即使在压力条件(诸如，冻融循环)下，病毒融合蛋白在融合前构象中也保持稳定。

在另外的方面，本发明涉及用于制备包含蛋白抗原的疫苗组合物的方法，所述方法包括将免疫有效量的所述蛋白抗原与稳定量的抗病毒化合物混合。

在一个特定方面，本发明提供了用于减少疫苗组合物中病毒融合蛋白聚集的方法。

在另一方面，本发明提供了用于减少疫苗组合物中病毒融合蛋白在所述疫苗组合物冻融后聚集的方法。

在又一方面，本发明提供用于保存包含蛋白抗原的疫苗的方法，该方法包括制备如本文所述的疫苗组合物。

本发明还提供用于稳定维持包含蛋白抗原的液体疫苗组合物的方法，该方法包括将如本文所述的疫苗组合物在2℃-8℃的温度下储存至少20个月。