[发明专利]一种肿瘤抗原/MHC-I复合物及其制备方法和用途

说明书

本发明涉及一种肿瘤抗原/MHC‑I复合物及其制备方法和用途。本发明基于鸟枪法的设计原理，从肿瘤细胞裂解物中一次性无差别抓取肿瘤细胞表达的肿瘤抗原与MHC‑I的复合物，无需预先对免疫原性肿瘤抗原进行鉴定，适用范围更广，步骤更加简便，成本也更低。本发明提供的肿瘤抗原/MHC‑I复合物可以特异性富集肿瘤浸润淋巴细胞中的CD8⁺T细胞，并能够诱导刺激肿瘤浸润淋巴细胞及其中的CD8⁺T细胞的活化和增殖，解决了肿瘤抗原特异性T细胞的“精准靶向”问题，增强肿瘤浸润淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤功能，可用于对肿瘤疾病的治疗以及ACT方法的优化。

技术领域

本发明涉及免疫学领域，尤其涉及一种肿瘤抗原/MHC-I复合物及其制备方法和在体外富集CD8⁺T细胞、刺激相同来源肿瘤浸润淋巴细胞的活化、增殖和/或制备治疗肿瘤的药物中的用途；还涉及一种体外富集CD8⁺T细胞的方法及所得的CD8⁺T细胞、一种体外刺激相同来源肿瘤浸润淋巴细胞的活化、增殖的方法及所得的肿瘤浸润淋巴细胞、相应的药物组合物，以及肿瘤的治疗方法。

背景技术

免疫系统与肿瘤之间的关系错综复杂：一方面，免疫系统能够通过多种免疫效应机制杀伤或清除肿瘤细胞；另一方面，肿瘤细胞也能通过多种机制抵抗或逃避免疫系统对其的杀伤和清除。肿瘤初期，免疫系统尝试清除被认为是“外源性”的肿瘤细胞，然而肿瘤细胞通过抗原缺失、减少自身抗原提呈、抗原调变、共刺激信号缺乏以及分泌免疫抑制性物质等方式，建立免疫抑制状态，逃脱机体免疫识别。因此，如何通过肿瘤细胞表达的肿瘤抗原诱导T淋巴细胞的抗肿瘤免疫应答是肿瘤免疫治疗研究的关键。

所谓肿瘤抗原是指细胞癌变过程中出现的新抗原(neoantigen)或肿瘤细胞异常表达或过表达的抗原物质。T细胞能够区分肿瘤细胞和正常细胞，是通过特异性的识别肿瘤细胞表达的独特的肿瘤抗原而引发免疫反应。尽管肿瘤细胞表达肿瘤抗原，但大多数肿瘤细胞的免疫原性比较弱，难以诱导机体产生针对这些抗原的特异性免疫应答。与此同时，肿瘤细胞通过下调或关闭主要组织相容性复合体(MHC)的表达，或者直接下调肿瘤抗原的产生，使MHC递呈肿瘤抗原的能力下降，导致体内针对肿瘤抗原应有的免疫应答缺乏特异性或能力不足以清除肿瘤细胞，造成肿瘤患者产生的免疫应答常不能有效清除肿瘤细胞。

肿瘤过继细胞治疗(adoptive Cell therapy,ACT)是将经体外扩增和激活处理的自体或异体免疫细胞(主要是自体细胞)过继回输入肿瘤患者体内，以增强患者免疫功能，达到治疗目的的方法。在过继性T细胞治疗过程中，T淋巴细胞是杀伤肿瘤细胞的最终执行者，其中，细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic Tlymphocytes,CTLs)是抗肿瘤免疫的主要效应细胞，介导特异性抗肿瘤免疫反应。在体内，这一作用过程依赖细胞间接触，在抗原呈递的过程中，肿瘤抗原可以递呈在MHC I类分子上，供T细胞识别，诱导CD8⁺细胞毒性T细胞的激活，启动适应性免疫应答。

人的MHC又称为人类白细胞抗原(HLA)基因复合体，作为抗原提呈分子参与适应性免疫应答，决定了T细胞识别抗原的MHC限制性。CTL细胞中CD8⁺T细胞可以识别MHC I类分子提呈的内源性抗原肽被激活，通过快速且精准的控制过程靶向肿瘤细胞，直接将肿瘤细胞杀死。但由于突变细胞或肿瘤细胞表面的MHC I类分子缺失或表达降低，致使肿瘤细胞不能有效提呈肿瘤抗原，以致不能有效的激活特异性CD8⁺CTL以杀伤肿瘤细胞，造成肿瘤免疫逃逸。