[发明专利]用于基因分型的试剂盒

权利要求书

1.一种试剂盒，包括：

流通池，所述流通池包括：

基底；以及

附接到所述基底的第一捕获引物和第二捕获引物；以及

基因分型探针流体，所述基因分型探针流体包括：

液体载体；以及

所述液体载体中的基因分型寡核苷酸，所述基因分型寡核苷酸包括：

第一引物序列；

表示靶基因分型基因座的探针序列；

限制性核酸内切酶位点；以及

第二引物序列，所述第二引物序列与所述第二捕获引物至少部分地互补。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其中所述基因分型探针流体包括多个基因分型寡核苷酸，并且其中每个基因分型寡核苷酸包括与每个其它基因分型寡核苷酸不同的探针序列。

3.根据权利要求1或2中的一项所述的试剂盒，其中所述第二捕获引物包括裂解位点。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其中所述限制性核酸内切酶位点对选自由以下组成的组的限制性核酸内切酶敏感：4碱基切割物限制性核酸内切酶、5碱基切割物限制性核酸内切酶和6碱基切割物限制性核酸内切酶。

5.根据权利要求1或2中的一项所述的试剂盒，其中所述第二捕获引物还包括第二限制性核酸内切酶位点，其中所述第二限制性核酸内切酶位点与所述基因分型寡核苷酸的所述限制性核酸内切酶位点互补。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其中所述限制性核酸内切酶位点和所述第二限制性核酸内切酶位点对IIS型甲基敏感的限制性核酸内切酶敏感。

7.根据权利要求1至6中的一项所述的试剂盒，其中所述基因分型寡核苷酸还包括所述第一引物序列与所述探针序列之间的索引序列部分和引发位点部分。

8.根据权利要求1至7中的一项所述的试剂盒，其中：

所述基底具有由间隙区域分开的凹入部；并且

所述第一捕获引物和所述第二捕获引物附接在所述凹入部中的每个凹入部内。

9.一种方法，包括：

将基因分型探针流体引入包括第一捕获引物和第二捕获引物的流通池，所述基因分型探针流体包括多个基因分型寡核苷酸，所述基因分型寡核苷酸中的每个基因分型寡核苷酸包括：

第一引物序列；

表示相应靶基因分型基因座的探针序列；

限制性核酸内切酶位点；以及

第二引物序列，所述第二引物序列与所述第二捕获引物至少部分地互补；

由此相应的基因分型寡核苷酸反应以产生来自相应基因分型寡核苷酸的扩增子的相应克隆群体；

使所述扩增子线性化以产生探针模板；

对所述探针模板的至少一个探针识别区段进行测序以识别所述探针序列中的每个探针序列；

从所述探针模板中去除至少相应的新生链，由此所述探针模板的末端处的3'OH基团被暴露；

将相应样品与所述探针模板杂交；以及

在暴露的3'OH基团处执行所述样品的相应基因分型反应。

10.根据权利要求9所述的方法，其中使所述扩增子线性化涉及：

在所述第二捕获引物的相应裂解位点处裂解附接到所述第二捕获引物的所述扩增子；以及

使附接到所述第二捕获引物的所述扩增子的裂解部分变性以产生所述探针模板。

11.根据权利要求10所述的方法，其中对所述探针模板的所述至少一个探针识别区段进行测序涉及使用所述第二捕获引物作为测序引物来沿着所述至少一个探针识别区段执行碱基延伸反应。

12.根据权利要求11所述的方法，其中从所述探针模板中去除至少相应的新生链涉及：

消解所述限制性核酸内切酶位点；以及

使来自所述探针模板的剩余的新生链变性。