[发明专利]一种引入标签序列的方法

权利要求书

1.一种引入标签序列的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：提供第一油相和第一水相，所述第一水相为制备包括UMI标签序列的核酸片段的反应体系，混合所述第一油相和所述第一水相形成第一乳液液滴，将所述包括UMI标签序列的核酸片段配置于不同的所述第一乳液液滴中，使每个所述第一乳液液滴中配置的所述核酸片段包括不同的所述UMI标签序列；

S2：提供样本和第一引物对，将所述样本中的每个DNA分子、所述第一引物对和所述包括UMI标签序列的核酸片段配置于不同的第二乳液液滴中，通过乳液PCR进行特异性扩增，得第一扩增产物，使位于一个所述第二乳液液滴中的所述第一扩增产物携带有相同的所述UMI标签序列；

S3：提供包括样本标签序列Index的第二引物对，以步骤S2所述第一扩增产物为模板进行扩增，得第二扩增产物，使所述第二扩增产物携带所述样本标签序列Index和所述UMI标签序列。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一乳液液滴是油包水乳液液滴，按第一油相和第一水相的体积比为(3～3.5)：1配制而成；

所述第一油相按稳定剂1：稳定剂2：乳化剂＝75：4：(800～1000)的体积比配制而成；所述稳定剂1包括司盘80、吐温80、吐温60或吐温20中的至少一种；所述稳定剂2包括TritonX-100或TritonX-114中的至少一种；所述乳化剂包括三聚甘油单硬脂酸酯或甘油硬脂酸酯中的至少一种。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述UMI标签序列被配置为包括8～12个碱基的随机序列。

4.根据权利要求1所述的方法，所述包括UMI标签序列的核酸片段被配置在载体上，所述载体连接在所述核酸片段的5’端。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述载体被配置为磁珠。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一引物对包括上游引物和下游引物。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述上游引物的5’端与所述包括UMI标签序列的核酸片段的3’端序列相同，所述上游引物的3’端为用于扩增所述样本中的所述DNA分子所需的上游引物序列。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述下游引物的3’端为用于扩增所述样本中的所述DNA分子所需的下游引物序列，连接所述下游引物的3’端的一段序列与所述包括UMI标签序列的核酸片段的一段序列相同。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第二乳液液滴按第二油相和第二水相的体积比为(3～3.5)：1配制而成；

所述第二油相按稳定剂1：稳定剂2：乳化剂＝75：4：(800～1000)的体积比配制而成；所述稳定剂1包括司盘80、吐温80、吐温60或吐温20中的至少一种；所述稳定剂2包括TritonX-100或TritonX-114中的至少一种；所述乳化剂包括三聚甘油单硬脂酸酯或甘油硬脂酸酯中的至少一种；

所述第二水相为步骤S2中所述乳液PCR的反应液。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第二扩增产物经PCR扩增得到。