[发明专利]一种鸭冷冻精液的制备方法

权利要求书

1.一种鸭冷冻精液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)称取D-果糖0.5-0.75g、谷氨酸钠0.6-0.9g、六水合氯化镁0.034-0.068g、醋酸钠0.2-0.43g、柠檬酸钠0.06-0.08g、磷酸二氢钾0.05-0.065g、磷酸氢二钠0.3-0.5g、N-三甲基-2-氨基乙磺酸0.15-0.2g、青霉素0.1g、链霉素0.1g和双蒸水100ml；

(2)将(1)所称取的原料溶解于100ml双蒸水中，调节PH值至7.0-7.4，制备得到鸭精子稀释液；

(3)人工诱导采集鸭精液，取少量步骤(2)中制备的鸭精子稀释液稀释鸭精液，显微镜下观察精子活力并进行计数，活力大于0.8的用于冷冻；

(4)根据计数结果用鸭精子稀释液将鸭精液按照1:1～3稀释，稀释后精液浓度为8-10×10⁸个/mL；

(5)按体积比向鸭精子稀释液中加入12-20％的冷冻保护剂DMA，然后放入4℃冰箱中预平衡1h，制备得到鸭精子冷冻保护液；

(6)将上述步骤(3)中获得的含精子的鸭精子稀释液与步骤(5)中获得的鸭精子冷冻保护液按1:1混匀，然后放入4℃冰箱中平衡30-60min；

(7)将步骤(6)中平衡后的含精子的鸭精子稀释液和鸭精子冷冻保护液一起吸入0.25mL的麦管中，制备得到冷冻精液管，将冷冻精液管置于液氮液面上方3cm处，平衡7min，投入液氮；

(8)将麦管投入液氮24h或以上时间后取出，迅速放进40℃水浴锅中30s，将麦管中的鸭精子转移至装有500μL体积的37℃鸭精子稀释液的1.5mL离心管中，2000转/min，离心1min，弃上清，重新加入250μL，37℃鸭精子稀释液，轻轻重悬精子。

2.根据权利要求1所述的一种鸭冷冻精液的制备方法，其特征在于，

所述步骤(2)中鸭精子稀释液在使用前需在37℃下进行预温，然后将稀释后的鸭精液在4℃冰箱中平衡1h，使其缓慢降至4℃。