[发明专利]一种阿尔兹海默症的基因诊断试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种阿尔兹海默症的基因诊断试剂盒及其应用，所述试剂盒包括：用于扩增如下基因的CDS区域的引物组：APP、APOE、PSEN1、PSEN2、ADAM10、PLD3、APBB2、HFE、NOS3、PAXIP1、PLAU、SORL1、A2M、BLMH、MPO、ACE和MAPT；所述引物组包括多重PCR引物组和桥式PCR引物组；所述桥式PCR引物组包括I5index引物组和I7index引物组，核苷酸序列如SEQ ID NO.1‑NO.150所示。采用多重PCR结合二代测序方法，可检测目的基因的SNV/Indel。

技术领域

本发明涉及分子生物学分析检测技术领域，涉及一种阿尔兹海默症的基因诊断试剂盒及其应用。

背景技术

阿尔茨海默病(Alzheimer’s Disease,AD)是一种中枢神经系统退行性变性疾病，主要的神经病理学改变包括β淀粉样蛋白Aβ沉积形成的细胞外老年斑，微管相关蛋白tau过度磷酸化导致的神经细胞内神经纤维缠结、神经元丢失、淀粉样血管改变等。根据发病年龄，AD可分为早发型AD(EOAD，发病年龄＜65岁)和晚发型AD(LOAD，发病年龄≥65岁)，EOAD呈现家族聚集性，LOAD则以散发性为主。APP、PSENl、PSEN2是家族性EOAD的致病基因，也是散发性LOAD的遗传易感因子。APP及其修饰基因、PSEN1、PSEN2、ADAM10基因变异可通过调节分泌酶活性从而影响AD患病风险；编码分拣蛋白相关受体1(SORL1)等胆固醇代谢调节基因、α2-巨球蛋白编码基因A2M基因、tau蛋白编码基因MAPT基因变异等均被发现可增加AD的患病风险。AD是一种多病因异质性疾病，其发病机理十分复杂，可能是多种因素(包括遗传因素、环境因素、神经递质功能、免疫功能等)相互作用的结果。目前主要的发病假说包括：遗传因素、以Aβ级联反应的为中心的神经元凋亡假说、Tau蛋白磷酸化异常介导的神经纤维缠结假说、衰老与氧化应激、胰岛素抵抗、金属稳态、神经递质通道假说等。AD是一个连续发展的疾病，通过对其病理生理特征的监测或许有利于更加早期、全面地治疗AD。2007年发布的国际工作组织(the International Working Group，IWG)-1诊断标准首次将生物标志物纳入AD诊断标准。2014年发布的IWG-2诊断标准将AD相关生物标志物进行了分类。美国国立衰老研究所和美国阿尔茨海默病协会将生物标志物作为临床前AD的诊断标准，并作为AD源性轻度认知障碍(mild cognitive impairment，MCI)以及AD源性痴呆的支持性证据。因此，关注血管病变相关疾病及对应的基因在AD的发生中起着重要作用，有助于尽早发现AD的早期阶段，对其进行危险因素筛查、认知评估、影像学检查，早期管理干预具有重要意义。

由于该病起病缓慢或隐匿，病人及家人常说不清何时起病，不能及时确定发病的时间。目前，检测AD的手段主要集中在神经心理学检验、血液检查、神经影像检查、脑电图、脑脊液生物标志物检测等。影像学方法存在价格高、对患者有放射性损伤等确定，脑脊液标志物检测则存在样本采集创伤性大、技术要求高等缺点，且只能在有发病征兆或发病初期检测出AD。

因此有必要开发一种通量大且准确性高的阿尔兹海默症的基因诊断试剂盒。

发明内容

针对现有技术所存在的技术问题，本发明提供了一种阿尔兹海默症的基因诊断试剂盒及其应用，通量大且准确性高。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

在本发明实施例的第一方面，提供了一种阿尔兹海默症的基因诊断试剂盒，所述试剂盒包括：

用于扩增如下基因的CDS区域的引物组：APP、APOE、PSEN1、PSEN2、ADAM10、PLD3、APBB2、HFE、NOS3、PAXIP1、PLAU、SORL1、A2M、BLMH、MPO、ACE和MAPT；

所述用于扩增如下基因的CDS区域的引物组包括多重PCR引物组和桥式PCR引物组；