[发明专利]一种从庆大霉素B菌株制备硫酸异帕米星的方法

权利要求书

1.一种从庆大霉素B菌株制备硫酸异帕米星的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤(1)：将庆大霉素B菌株制成孢子悬浮液，接种于种子培养基中，33～37℃下摇床220～280rpm培养2～4天；

步骤(2)：将种子培养基接种于发酵罐里的发酵培养基中，33～37℃下发酵5～6天，发酵完成后放罐，提取发酵液；

步骤(3)：向发酵液中加酸使其pH值为1.5～3，搅拌2～3小时，再向发酵液中加碱使其pH值为7～9，搅拌0.5～1小时，并向发酵液中加入阳离子交换树脂，树脂添加量为庆大霉素B发酵总重量的40～60倍，搅拌吸附10～16小时，至液相跟踪监测发酵液中无庆大霉素B单位；

步骤(4)：将吸附完成的树脂经漂洗后装柱，水洗后用浓氨水解析；

步骤(5)：氨水解析液通过浓缩后，用酸调节pH值为6～7，通过阳离子树脂进行柱分离，再用稀氨水进行解析，收集庆大霉素B组分段；

步骤(6)：将收集到的庆大霉素B组分段浓缩、结晶，得到庆大霉素B；

步骤(7)：以庆大霉素B为起始原料，加入保护剂，得到中间体；

步骤(8)：中间体再与侧链活性酯进行反应，形成粗品异帕米星；

步骤(9)：粗品异帕米星经过脱保护及精制，得到硫酸异帕米星成品。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述种子培养基的组成为：玉米淀粉1～3g/L，黄豆饼粉1～3g/L，葡萄糖0.1～0.5g/L，干酵母1～2g/L，大豆蛋白胨0.2～0.5g/L，硝酸钾0.01～0.1g/L，硫酸铵0.01～0.1g/L，碳酸钙0.1～0.5g/L。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述发酵培养基的组成为：玉米淀粉5～10g/L，黄豆饼粉3～5g/L，大豆蛋白胨0.1～1g/L，氯化钴0.1～0.5g/L，硫酸亚铁0.001～0.01g/L，硫酸镁0.1～1g/L，氯化钠0.001～0.005g/L，碳酸钙0.1～0.5g/L。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述酸为盐酸或硫酸，浓度为6～12mol/L，所述碱为氢氧化钠，浓度为4～6mol/L，所述树脂为阳离子交换树脂732、Lewatit-100或DiaionSK-1。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中所述氨水浓度为1～2mol/L。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(5)中所述阳离子树脂为DK-1、D152或HD-2，氨水浓度为0.1～0.2mol/L。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(6)中所述浓缩方式为薄膜浓缩或纳滤，结晶方式为喷雾干燥或冻干。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(7)的具体反应过程为：反应瓶中加入庆大霉素B、硼酸、保护剂乙二醇或丙三醇，控制庆大霉素B和硼酸的质量比1:1～2:1，用20％氢氧化钠溶液调节pH值为9.5～10.5，搅拌状态下，在40～60℃反应4～10小时，冷却至室温后得中间体。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(8)的具体反应过程为：中间体与侧链活性酯N-取代苯酐-(S)-异丝氨酸-N-取代苯酐酯反应，并加入乙醇，在30～60℃下反应12～24小时，冷却至室温结晶得异帕米星粗品。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(9)的具体过程为：向异帕米星粗品中缓慢加入5～10％的稀硫酸使其pH值为5～6，充分搅拌后过滤得硫酸异帕米星粗品，将硫酸异帕米星粗品溶于水后，向其中加入无水乙醇至不再有沉淀析出，过滤得硫酸异帕米星成品。