[发明专利]一种用于检测ALL相关基因SNP的SNaPshot多重分析试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及一种针对多个ALL相关SNP位点的SNaPshot多重分析试剂盒及其应用，所述SNaPshot多重分析试剂盒包括多重扩增引物组和多重测序引物组。SNaPshot多重分析试剂盒的检测结果和sanger测序法检测结果一致，可实现准确检测ALL的5种基因常见的SNP位点。且相比于sanger测序法，本发明的SNaPshot多重分析试剂盒的结果分析和实验流程更加快捷高效。以此提高ALL基因多态性的检测效率，降低了检测成本。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，尤其是涉及一种用于检测ALL相关基因SNP的SNaPshot多重分析试剂盒及其应用。

背景技术

随着众多基因的SNP位点的发现，急性淋巴细胞白血病(ALL)儿童患儿的用药个体化与基因多态性的关系正日益得到关注，影响ALL患儿化疗药物代谢的基因多态性已被作为ALL化疗不良反应与预后的预测因素。

测序技术是分子生物学最重要的检测手段，是基因多态性和基因突变检测的金标准，也是其他众多技术方法的参考标准。测序技术的优势在于，直接测定样本的基因序列，得到基因变异的精确情况，并且能够对某一段DNA序列进行多位点突变检测，或未知突变检测，广泛应用在肿瘤靶向药物个体化治疗检测、遗传疾病基因突变检测、血液病基因突变检测、HLA分型与配型、病原微生物耐药性检测等等诸多领域。第一代DNA测序技术用的是1975年由Sanger和Coulson开创的链终止法或Maxam和Gilbert发明的化学法(链降解)。其中常用的Sanger测序(双脱氧末端终止法)的原理是将被荧光标记的ddNTP掺入到dNTP中，由于ddNTP随机掺入，PCR产物从引物之后的第一个碱基开始，每一个位置都有可能是ddNTP。由于ddNTP缺乏链延伸所需要的3'-OH，链的延伸就选择性地在G、A、T或C处终止。这样的PCR产物与普通PCR不一样，不能形成一条电泳带，而是一组长度相差一个碱基的成百上千种片段。它们具有共同的起始点，终止在不同的的核苷酸上，每一个碱基都有相同的概率被终止。将得到的不同大小的片段进行毛细管电泳，通过对荧光信号的采集和拼接，最终获得目的片段的序列。其特点是高读长；检测通量中的；检测灵敏度低；单孔成本低，适用于少数基因的少量位点测序，广泛应用于临床检测和科研研究。

SNaPshot多重分析系统又称为小测序技术，是一种基于引物单碱基延伸的方法，在一个含有测序酶，四种荧光标记的ddNTP，紧挨多态位点5’端的不同长度延伸引物和PCR产物模板的反应体系中，引物延伸一个碱基即终止，经ABI测序仪跑胶后，根据峰的颜色可知掺入的碱基种类，从而确定该样本的基因型。通过针对不同的SNP位点设计不同长度的延伸引物来做到多个SNP在一个反应体系中进行分型。SNaPshot既拥有Sanger测序中ddNTP单碱基延伸就终止的特点，又具有片段分析通量较高的属性。

发明内容

基于上述背景技术，本发明要解决的技术问题是提供一种用于检测ALL相关基因SNP的SNaPshot多重分析试剂盒及其应用，以此提高ALL基因多态性的检测效率，降低了检测成本。

首先，本发明提供的SNaPshot多重分析试剂盒包括多重扩增引物组和多重测序引物组。

优选地，所述试剂盒包括2*Vazyme mix、SNaPshot mix和ddH₂O。

其次，本发明提供了一种用于检测ALL相关基因SNP的SNaPshot多重扩增引物组，所述ALL相关基因SNP以及引物序列如下表所示：

其次，本发明还提供了一种用于检测ALL相关基因SNP的SNaPshot多重扩增引物组的工作液，该工作液的具体配置如下表所示：其中，上下游引物各自浓度均为100μM，