[发明专利]一种烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的纯化方法

说明书

本发明提供一种烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的纯化方法，所述纯化方法包括以下步骤：将反应液依次进行固液分离、超滤、阴离子交换树脂处理、纳滤、脱色和干燥，得到高纯度烟酰胺腺嘌呤二核苷酸。本发明提供的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的纯化方法，在阴离子交换树脂冲洗和洗脱的过程中均采用纯化水，无需有机溶剂进行冲洗和洗脱，更绿色环保，成本更低；洗脱液浓缩后只需真空冷冻干燥，与析晶方式相比，产品收率高，产品中无化学试剂残留，产品质量更好；本发明提供的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的纯化方法具有工艺操作简单，收率高，产品质量好，绿色环保，成本低的显著优势。

技术领域

本发明属于核苷酸类辅酶技术领域，具体涉及一种烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的纯化方法。

背景技术

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)是有机体必不可少的多功能小分子，主要作为氧化还原酶的重要辅酶和NADP(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸)的来源。NAD(H)参与的多酶氧化还原体系是生物体细胞呼吸链中电子传递过程的主要生物氧化体系，糖、脂、蛋白质三大代谢物质分解中的氧化反应绝大部分也都是通过这一体系完成的。NAD+在医药领域具有巨大应用价值。

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)的制备方法主要分为化学合成法和生物催化法，化学合成用到大量的化学试剂，环境污染大且收率低；目前生物催化法具有绿色环保无公害的优点而逐渐成为主流方向。

目前烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)生物催化合成的纯化方法有以下几种：

CN104876993A公开了一种采用反向高效液相色谱制备柱进行分离纯化NAD+的方法，但是存在成本高，且不易工业化的问题。

CN111065644A公开了一种采用析晶多次升温过滤，调pH的方式进行提纯NAD+的方法；但是该方法操作工艺复杂，在调pH过程中，存在产物分解的风险，且在析晶过程中用到化学试剂乙醇，产品中会残留有机试剂。

CN109836469A公开了一种辅酶I的脱色工艺，该发明采用经过活化的AMK867树脂(大孔弱碱性丙烯酸阴离子树脂)为吸附材料，将待脱色的辅酶I料液流经AMK867树脂吸附辅酶I，而色素以及部分杂质不被填料吸附，被水冲洗下去，吸附完成；将吸附完成后的AMK867树脂用氯化钠洗脱剂进行解析，收集解析下来的辅酶I料液。但是，该技术方案重点是解决了最终产品的外观颜色深的技术难题，由于辅酶I可以比较牢固的吸附在该阴树脂上，需要用含氯化钠的水溶液进行洗脱，洗脱液中含有大量的无机盐(氯化钠)，后续需要继续进行多次纳滤脱盐，产品有损失，降低收率。

CN105481923A公开了一种烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的制备方法，将反应后得到的浓缩液依次经过D152树脂、717树脂纯化，纳滤浓缩后，用丙酮进行析晶沉淀，得到辅酶I粗品；粗品经过溶解后，采用改性硅胶的制备色谱进行纯化，脱盐后，纳滤浓缩后冻干得到成品。但是，该工艺中多次纯化(D152树脂，717树脂，改性硅胶制备色谱)，多次纳滤浓缩，工艺繁琐，特别是经过D152纯化时，用到氨水洗脱，产品在碱性条件下不稳定，存在分解的风险；在纯品制备过程中，采用改性硅胶制备色谱分离，成本高，粗品制备过程中用到有机溶剂丙酮析晶，且最终所得的产品质量不高(纯度最高为99.3％)。

CN107417749A公开了一种辅酶I的树脂填料分离方法，将过滤后的含有辅酶I的细胞过滤液经过D945大孔树脂柱交换后水洗和洗脱，D945大孔树脂的比表面积大、吸附力强、选择性高、重复利用率高，不需要调节PH，条件要求比较温和，且能在辅酶I最适宜的PH范围内进行分离操作，降低副产品的生成率，大大提高了辅酶I经树脂分离后的纯度；但是，大孔树脂在洗脱和再生过程中均需要有机溶剂乙醇，成本高，由于洗脱液中存在有机溶剂，后续在去除过程存在一定的问题；采用纳滤浓缩的方式去除乙醇，有机溶剂会对普通的纳滤膜有一定损伤；采用加热去除乙醇，会对产品产生破坏。

因此，如何提供一种工艺操作简单、收率高、产品质量好、绿色环保、成本低的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的纯化方法，成为目前亟待解决的问题。

发明内容