[发明专利]一种烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的纯化方法

权利要求书

1.一种烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的纯化方法，其特征在于，所述纯化方法包括以下步骤：将反应液依次进行固液分离、超滤、阴离子交换树脂处理、纳滤、脱色和干燥，得到烟酰胺腺嘌呤二核苷酸纯品。

2.根据权利要求1所述烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的纯化方法，其特征在于，所述反应液为采用生物酶催化法制备烟酰胺腺嘌呤二核苷酸得到的反应液；

优选地，所述反应液经冻干后按质量百分含量计包括：烟酰胺腺嘌呤二核苷酸92-94％、烟酰胺单核苷酸0.8-1.0％、三磷酸腺苷1.9-2.1％、二磷酸腺苷1.2-1.3％、酶蛋白1.5-2.0％和其他杂质0.6-1.6％；

优选地，所述烟酰胺腺嘌呤二核苷酸纯品的HPLC纯度在99.5％以上。

3.根据权利要求1或2所述烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的纯化方法，其特征在于，所述固液分离采用的方式为过滤或沉降离心；

优选地，所述过滤采用的滤纸为中速滤纸，所述滤纸的孔径为30-50μm；

优选地，所述沉降离心的转速为3500-4500rpm，时间为13-17min。

4.根据权利要求1-3中任一项所述烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的纯化方法，其特征在于，所述超滤采用中空纤维膜；

优选地，所述中空纤维膜的截留分子量为8000-100000D，优选为8000-10000D。

5.根据权利要求1-4中任一项所述烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的纯化方法，其特征在于，所述阴离子交换树脂处理所采用的阴离子交换树脂的粒径为0.315-1.25mm；

优选地，所述阴离子交换树脂包括OH型阴离子交换树脂和/或Cl型阴离子交换树脂，优选为Cl型阴离子交换树脂；

优选地，所述阴离子交换树脂处理所采用的阴离子交换树脂包括弱碱性阴离子交换树脂；

优选地，所述弱碱性阴离子交换树脂包括凝胶型弱碱性阴离子交换树脂和/或大孔型弱碱性阴离子交换树脂，优选为大孔型弱碱性阴离子交换树脂；

优选地，所述大孔型弱碱性阴离子交换树脂包括大孔型弱碱性丙烯酸系阴离子交换树脂和/或大孔型弱碱性苯乙烯系阴离子交换树脂，优选为大孔型弱碱性苯乙烯系阴离子交换树脂；

优选地，所述大孔型弱碱性苯乙烯系阴离子交换树脂包括D301和/或D301G，优选为D301；

优选地，所述阴离子交换树脂处理所采用的层析柱的径高比为1:(4-12)；

优选地，所述阴离子交换树脂的用量为反应液中烟酰胺腺嘌呤二核苷酸质量的30-50倍，优选为35-45倍。

6.根据权利要求1-5中任一项所述烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的纯化方法，其特征在于，所述阴离子交换树脂处理包括依次进行的上样、冲洗和洗脱；

优选地，所述上样中，超滤得到的超滤液的上样速度为1-2倍树脂填充体积/h，优选为1-1.2倍树脂填充体积/h；

优选地，所述冲洗和洗脱采用的溶剂均包括水，优选为纯化水；

优选地，所述冲洗和洗脱采用的溶剂总量为树脂填充体积的8-12倍，优选为9.5-10.5倍；

优选地，所述冲洗采用的溶剂量为树脂填充体积的2-4倍；

优选地，所述洗脱采用的溶剂量为树脂填充体积的6-8倍；

优选地，所述冲洗和洗脱的速度均为1-3倍树脂填充体积/h，优选为1.5-2.5倍树脂填充体积/h；

优选地，所述阴离子交换树脂处理后得到的洗脱液中烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的HPLC纯度在99％以上。

7.根据权利要求1-6中任一项所述烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的纯化方法，其特征在于，所述纳滤所采用的纳滤膜的截留分子量为160-200D；

优选地，所述纳滤得到的纳滤液中烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的质量含量为5-15％，优选为8-12％。