[发明专利]一种基于RAA等温扩增方法的新冠病毒检测试剂盒及应用

说明书

本发明公开了一种基于RAA等温扩增方法的新冠病毒检测试剂盒及应用，包括ORF1ab‑F、ORF1ab‑R、ORF1ab‑P、A buffer、B buffer和包含有ORF1ab基因碱基序列的质粒，作为阳性质控品，其中ORF1ab为针对于检测位点包含病毒基因组中的保守基因序列。利用近年来新兴的等温扩增技术，在恒定的温度下对目标核酸片段进行扩增，此法对仪器的要求大大简化，摆脱了热循环仪的限制，减小了核酸扩增的复杂程度，反应时间也大大缩短，提高检测效率，配合免疫层析技术，还可实现不需专业人员操作的新冠病毒核酸可视化检测。

技术领域

本发明属于病毒检测的技术领域，特别是涉及一种基于RAA等温扩增方法的新冠病毒检测试剂盒及应用。

背景技术

新型冠状病毒具有高传染性和高隐蔽性，感染病毒的人会出现不同程度的症状，有的只是发烧和轻微咳嗽，有的会发展成为肺炎，严重的可能会导致死亡，并且该病可通过直接传播、气溶胶传播、接触传播、母婴传播等多种方式进行扩散，对人体和社会的危害巨大，为了应对疫情，临床上迅速出现了多种新冠病毒感染检测方法，主要分为抗体检测，抗原检测，核酸检测及胸部影响学检测等，由于抗体及影像学检测相对滞后，不利于及时发现感染，而抗原的检出率偏低，均不能满足满足临床要求，因此临床确诊主要采用核酸检测法。

目前新冠病毒核酸检测的方法主要是荧光定量PCR，通过一系列升温和降温的程序，可以将微量的核酸序列放大到能够被仪器检测到的水平，检测灵敏度高，能够检测处于潜伏期的病原体，可以很好地满足临床需求。而近年来新兴的等温扩增技术，可在恒定的温度下对目标核酸片段进行扩增，对仪器的要求大大简化，摆脱了热循环仪的限制，减小了核酸扩增的复杂程度，反应时间也大大缩短。本发明即提出一种基于等温扩增技术的新冠病毒检测方法，提高检测效率，缩短反应时间的同时，配合免疫层析技术，还可实现不需专业人员操作的新冠病毒核酸可视化检测。

发明内容

本发明的目的在于提出一种基于RAA等温扩增方法的新冠病毒检测试剂盒及应用，提高检测效率，缩短反应时间的同时，配合免疫层析技术，还可实现不需专业人员操作的新冠病毒核酸可视化检测。

为解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案实现的：

一种基于RAA等温扩增方法的新冠病毒检测试剂盒，包括ORF1ab-F、 ORF1ab-R、ORF1ab-P、A buffer、B buffer和包含有ORF1ab基因碱基序列的质粒，作为阳性质控品；

其中ORF1ab为针对于检测位点包含病毒基因组中的保守基因序列， ORF1ab-F为cDNA正向引物序列，ORF1ab-R为cDNA逆向引物序列，ORF1ab-P 为包含有ORF1ab的等温扩增引物探针组合。其中ORF1ab-F、ORF1ab-R和 ORF1ab-P的标准量均为10μL规格。

进一步地，包含有ORF1ab基因碱基序列的质粒，其对应的碱基序列为：

ATAACAGTTACACCGGAAGCCAATATGGATCAAGAATCCTTTGGTGGTGCATCGTGTTGT CTGTACTGCCGTTGCCACATAGATCATCCAAATCCTAAAGGATTTTGTGACTTAAAAGGTAAGT ATGTACAAATACCTACAACTTGTGCTAATGACCCTGTGGGTTTTACACTTAAAAACACAGTCTG TACCGTCTGCGGTATGTGGAAAGGTTATGGCTGTAGTTGTGATCAACTCCGCGAACCCATGCTT CAGTCAGCTGATGCACAATCGTTTTTAAACGGGTTTGCGGTGTAAGTGCAGCCCGTCTTACACC GTGCGGCACAGGCACTAGTACTGATGTCGTATACAGGGCTTTTGACATCTACAATGATAAAGTA GCTGGTTTTGCTAAA。

进一步地，所述ORF1ab-F、ORF1ab-R对应的引物序列为：