[发明专利]一种利那洛肽的合成和纯化方法

说明书

本发明公开了一种利那洛肽的合成和纯化方法，属于医药合成领域，具体涉及一种利那洛肽的合成方法，将含有Fmoc‑Tyr(OtBu)‑OH的利那洛肽氨基酸活化偶联液和载体树脂反应，得到Fmoc‑Tyr(OtBu)‑树脂；Fmoc‑Tyr(OtBu)‑树脂按利那洛肽氨基酸顺序依次偶联相应氨基酸，得到利那洛肽线性肽树脂；利那洛肽线性肽树脂经第一组氧化体系氧化环化形成首个二硫键后，经裂解反应，再经第二组氧化体系氧化环化形成剩余二硫键，经沉淀得到利那洛肽粗肽；第二组氧化体系中使用了GSSG、N‑乙酰基‑3‑巯基‑D‑缬氨酸和N‑氯代琥珀酰亚胺。

技术领域

本发明属于医药合成领域，具体涉及一种利那洛肽的合成和纯化方法。

背景技术

利那洛肽（linaclotide）是首个鸟苷酸环化酶（GC）激动剂类药物，口服进入人体后通过与肠道中的鸟苷酸环化酶C型受体（GC-C）结合，使细胞内和细胞外环鸟苷酸（cGMP）浓度升高, 刺激肠液分泌，加快胃肠道移行，从而增加排便频率。2012年，利那洛肽被美国食品和药物管理局（FDA）批准可以用于治疗成人慢性特发性便秘和便秘型肠易激综合症（IBS-C），由于其独一无二的作用机制，很有希望成为一种不但可以治疗便秘，还可以治疗腹胀、腹痛和其它临床症状的治疗药物。利那洛肽为含有三对二硫键的十四肽，其肽链中的二硫键连接方式为Cys1-Cys6，Cys2-Cys10，Cys5-Cys13。目前，对利那洛肽的合成主要以自由氧化法形成三对二硫键为主，选择性氧化合成利那洛肽的研究很少。

发明内容

利那洛肽线性主链N端到C端的氨基酸顺序如下：

NH₂-Cys¹-Cys²-Glu³-Tyr⁴-Cys⁵-Cys⁶-Asn⁷-Pro⁸-Ala⁹-Cys¹⁰-Thr¹¹-Gly¹²-Cys¹³-Tyr¹⁴-COOH；

二硫键分别位于Cys1-6、Cys2-10、Cys5-13。

利那洛肽氨基酸的偶联单体的使用顺序：Fmoc-Tyr(OtBu)-OH、Fmoc-Cys(Mmt)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Thr(OtBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Cys(StBu)-OH、Fmoc-Cys(Mmt)-OH、Fmoc-Tyr(OtBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH和Fmoc-Cys(StBu)-OH。

本发明的目的在于提供一种收率高、可得到高纯度利那洛肽的利那洛肽的合成方法。

本发明为实现上述目的所采取的技术方案为：

一种利那洛肽的合成方法，包括：

将含有Fmoc-Tyr(OtBu)-OH的利那洛肽氨基酸活化偶联液和载体树脂反应，得到Fmoc-Tyr(OtBu)-树脂；

Fmoc-Tyr(OtBu)-树脂按利那洛肽氨基酸顺序依次偶联相应氨基酸，得到利那洛肽线性肽树脂；

利那洛肽线性肽树脂经第一组氧化体系氧化环化形成首个二硫键后，经裂解反应，再经第二组氧化体系氧化环化形成剩余二硫键，经沉淀得到利那洛肽粗肽；

第二组氧化体系中使用了GSSG、N-乙酰基-3-巯基-D-缬氨酸和N-氯代琥珀酰亚胺。

优选地，利那洛肽氨基酸活化偶联液中含有HBTU、HOBt、DMAP和DIC。