[发明专利]一种利那洛肽的合成和纯化方法

权利要求书

1.一种利那洛肽的合成方法，包括：

将含有Fmoc-Tyr(OtBu)-OH的利那洛肽氨基酸活化偶联液和载体树脂反应，得到Fmoc-Tyr(OtBu)-树脂；

Fmoc-Tyr(OtBu)-树脂按利那洛肽氨基酸顺序依次偶联相应氨基酸，得到利那洛肽线性肽树脂；

利那洛肽线性肽树脂经第一组氧化体系氧化环化形成首个二硫键后，经裂解反应，分离得到首对二硫键利那洛肽线性肽，溶于去离子水得到首对二硫键利那洛肽线性肽溶液，再经第二组氧化体系氧化环化形成剩余二硫键，经沉淀得到利那洛肽粗肽；

所述利那洛肽线性主链N端到C端的氨基酸顺序如下：

NH₂-Cys¹-Cys²-Glu³-Tyr⁴-Cys⁵-Cys⁶-Asn⁷-Pro⁸-Ala⁹-Cys¹⁰-Thr¹¹-Gly¹²-Cys¹³-Tyr¹⁴-COOH；

二硫键分别位于Cys1-6、Cys2-10、Cys5-13；

所述Cys1及Cys6的单体为Fmoc-Cys(StBu)-OH；

所述Cys2及Cys10的单体为Fmoc-Cys(Trt)-OH；

所述Cys5及Cys13的单体为Fmoc-Cys(Mmt)-OH；

所述首个二硫键位于Cys1-6位；

所述第一组氧化体系为N-氯代琥珀酰亚胺溶液，溶剂为DMF；

所述第二组氧化体系中使用了GSSG、N-乙酰基-3-巯基-D-缬氨酸和N-氯代琥珀酰亚胺；

所述首对二硫键利那洛肽线性肽溶液中首对二硫键利那洛肽线性肽的含量为0.6-1.8wt%；

所述GSSG的使用量为首对二硫键利那洛肽线性肽溶液的1.2-3.6 wt%；

所述N-乙酰基-3-巯基-D-缬氨酸的使用量为首对二硫键利那洛肽线性肽溶液的0.3-0.9 wt%；

所述第二组氧化体系中的N-氯代琥珀酰亚胺溶于乙腈溶液，所述N-氯代琥珀酰亚胺的乙腈溶液中N-氯代琥珀酰亚胺的含量为40-60 wt%；所述N-氯代琥珀酰亚胺的乙腈溶液的添加量为首对二硫键利那洛肽线性肽溶液的8-24 wt%。

2.根据权利要求1所述的一种利那洛肽的合成方法，其特征是：所述利那洛肽氨基酸活化偶联液中含有HBTU、HOBt、DMAP和DIC。

3.根据权利要求1所述的一种利那洛肽的合成方法，其特征是：所述载体树脂为Wang树脂或CTC树脂。

4.根据权利要求1所述的一种利那洛肽的合成方法，其特征是：所述载体树脂经预处理液溶胀，所述预处理液为DMF。

5.一种利那洛肽的纯化方法，包括：权利要求1-4任一所述的一种利那洛肽的合成方法；以及，将所得利那洛肽粗肽经高效液相分离纯化得到利那洛肽。

6.GSSG、N-乙酰基-3-巯基-D-缬氨酸和N-氯代琥珀酰亚胺在按权利要求1的方法制备利那洛肽中的用途。