[发明专利]一种重组人源胶原蛋白的制备方法及其产品与应用

说明书

本发明涉及一种重组人源胶原蛋白的制备方法及其产品与应用。所述重组人源胶原蛋白的制备方法包括培养菌体、诱导表达重组人源胶原蛋白、离心收集菌体、破碎菌体、离心收集上清液、过镍琼脂糖凝胶柱层析、过葡聚糖凝胶柱层析、洗脱等步骤，工艺简单，制备得到的重组人源胶原蛋白纯度高、稳定性好，活性保持时间长，能够显著地促进细胞增殖及迁移，在护肤类产品领域具有重要的应用价值。

技术领域

本发明属于蛋白提取技术领域，涉及一种重组人源胶原蛋白的制备方法及其产品与应用。

背景技术

胶原蛋白是生物高分子，动物结缔组织中的主要成分，也是哺乳动物体内含量最多、分布最广的功能性蛋白，占蛋白质总量的25％-30％，某些生物体甚至高达80％以上。胶原蛋白因具有良好的生物相容性、可生物降解性以及生物活性，因此在食品、医药、组织工程、化妆品等领域获得广泛的应用。但是胶原蛋白在临床应用中还存在许多问题，主要障碍是所用胶原的来源，来源于动物或者人体的胶原蛋白主要缺点是可能会传播疾病，过敏反应，病原体污染等。因此，制备一种能等效且安全替代胶原蛋白的重组人源胶原蛋白是目前亟待完成的任务。

重组人源胶原蛋白结构跟人体来源的胶原蛋白一模一样，同时在此基础上进行优化，提高胶原蛋白的亲水性以及活性。并且其含有丰富的亲水基团，具有良好的成膜性，保持皮肤角质层水分。另一方面可以增加成纤维细胞的粘附和增殖，补充伤口创面的胶原蛋白并促进其沉积，降低瘢痕的发生几率。它的趋向性引导作用可引导上皮细胞快速进入受损部位，有效提高皮肤再生速度，缩短创伤愈合时间，从而恢复皮肤屏障功能。是一种对伤口愈合非常有治疗潜力的蛋白，有上皮组织损伤处均可使用之，可应用于烧烫伤、外伤、手术作口、慢性溃疡、溃疡性肠炎等疾病的辅助治疗中。基于重组人源胶原蛋白的重要作用，研究人员为此开发了多种制备、纯化方法。

例如CN113621053A公开了一种重组人源胶原蛋白及其制备方法和应用，该制备方法包括如下步骤：获得重组载体：选取人类三型胶原保守区域肽段，将该序列重复8次进行人工全基因合成RHIIIC8，将其构建到pET22b的表达载体中获得重组载体；构建重组基因工程菌：提取质粒、将其转化到BL21-DE3-PLySs感受态细胞中，挑取单克隆并对其扩大培养，获得重组基因工程菌；制备重组人源胶原蛋白：经过诱导表达目的蛋白，然后对表达产物进行分离纯化，得到高纯度的可溶于水的重组人源胶原蛋白。该发明制得的重组人源胶原蛋白具有活性高的特点，可以广泛应用于生物医药和化妆品行业。

例如CN108070032A公开了一种重组人源胶原蛋白的纯化方法，先采用固液分离技术、过滤技术以及超滤技术对大批量的重组人源胶原蛋白进行粗纯，然后用离子交换层析技术进行精纯，所得目标蛋白纯度高，收率高，可满足重组人源胶原蛋白工业化生产要求。

CN106008702A公开了一种规模化分离纯化重组人源胶原蛋白的方法，通过将线性重组蛋白进行初折叠和重折叠，精确控制蛋白分子的空间半径，既有利于微滤和超滤膜孔径的精确选型，又可提高蛋白的回收率，联合应用微滤和超滤，分别去除大分子和小分子杂质，同时超滤实现蛋白浓缩，减轻了后期凝胶柱层析分离的负荷，再通过加入尿素，实现重组蛋白折叠后的解旋，避免了有害物的残留。所得目标蛋白纯度高，收率高，可满足重组人源胶原蛋白工业化生产要求。

然而，现有技术常用的人重组人源胶原蛋白的制备方法，尤其是纯化方法比较复杂，步骤繁琐，而且制备得到的重组人源胶原蛋白溶液的稳定性差，容易析出，重组人源胶原蛋白生物学活性难以长期保持。

因此如何开发一种工艺简单，能够提高重组人源胶原蛋白的纯度，且利于其活性保持的重组人源胶原蛋白的制备方法，并提供一种合适的保存条件以促进其稳定性的提高成为了本领域目前迫切需要解决的问题。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种重组人源胶原蛋白的制备方法及其产品与应用。

为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：