[发明专利]一种重组人源胶原蛋白的制备方法及其产品与应用

权利要求书

1.一种重组人源胶原蛋白的制备方法，其特征在于，所述重组人源胶原蛋白的制备方法包括如下步骤：

(1)培养菌体，诱导表达重组人源胶原蛋白，得发酵液；

(2)离心收集菌体、破碎菌体、离心收集上清液；

(3)步骤(2)所得上清液过镍琼脂糖凝胶柱层析、洗脱，得洗脱液；

(4)步骤(3)所得洗脱液过葡聚糖凝胶柱层析、洗脱，得所述重组人源胶原蛋白。

2.如权利要求1所述的重组人源胶原蛋白的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述菌体为大肠杆菌工程菌；

优选地，所述培养菌体中使用的培养基包括蛋白胨、酵母提取物、葡萄糖、消泡剂和无机盐；

优选地，所述蛋白胨包括胰蛋白胨和/或酪蛋白胨；

优选地，所述酵母提取物包括酵母粉、酵母浸出物、酵母裂解物或酵母裂解提取物中的任意一种；

优选地，所述消泡剂包括椰油和/或柠檬酸；

优选地，所述无机盐包括氯化钠、硫酸镁、硫酸铵、氯化钙或磷酸盐中的任意一种或至少两种的组合；

优选地，所述磷酸盐包括磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钾或磷酸二氢钾中的任意一种或至少两种的组合。

3.如权利要求1或2所述的重组人源胶原蛋白的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述培养菌体中使用的培养基包括浓度为20-30g/L的蛋白胨、浓度为20-30g/L的酵母提取物、浓度为1-3g/L的葡萄糖、浓度为0.8-1.2g/L的消泡剂、浓度为4-6g/L的氯化钠、浓度为0.8-1.2g/L的硫酸镁、浓度为0.4-0.6g/L的硫酸铵、浓度为0.015-0.025g/L的氯化钙、浓度为8-12mmol/L的磷酸盐和水；

优选地，步骤(1)所述培养的温度为36-38℃；

优选地，步骤(1)所述诱导是指当菌体长至对数生长中期时进行，使用的诱导剂包括IPTG，IPTG在培养基中的终浓度为0.3-0.5mmol/L；

优选地，所述诱导的温度为33-35℃，所述诱导的时间为3-5h。

4.如权利要求1-3中任一项所述的重组人源胶原蛋白的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述离心收集菌体的速度为20-50L/h，转速为12000-18000rpm；

优选地，步骤(2)所述破碎菌体采用高压破碎，压力为800-1200bar；

优选地，步骤(2)所述离心收集上清液中离心的转速为12000-16000rpm，离心的时间为30-50min；

优选地，步骤(2)所述离心收集上清液后还包括过膜；

优选地，所述膜的尺寸为0.45μm。