[发明专利]对神经细胞进行活细胞检验的方法以及药物筛选方法

说明书

本发明涉及对神经细胞进行活细胞检验的方法以及药物筛选方法。根据本申请的对神经细胞进行活细胞检验的方法包括：利用DPBS溶液，将神经细胞进行清洗；利用Hoechst，对神经细胞进行细胞核染色；利用DPBS溶液，对经过细胞核染色的神经细胞进行清洗；利用钙黄绿素，对神经细胞进行细胞质染色，以便得到核质着色的神经细胞；采用高内涵分析系统，对核质着色的神经细胞进行神经细胞分析，以便确定神经细胞的活细胞特征。根据本申请的实施例，能够极大的缩短染色的时间周期，能够更好地反映活细胞的实时状态，通过高内涵分析平台，也能够更精确地识别细胞数量和形态。利用钙黄绿素，对神经细胞进行细胞质染色，以便得到核质着色的神经细胞。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地，本发明涉及对神经细胞进行活细胞检验的方法以及药物筛选方法。

背景技术

目前，并未有简便的手段能够实现，神经细胞的活细胞检验。传统的免疫荧光染色方法并不能精确地区分损伤神经细胞与正常细胞的某些活细胞特征，例如平均轴突长度、平均属兔长度和平均分支数等。

因此，目前对于神经细胞的活细胞检验方法仍有待改进。

发明内容

本申请是基于发明人对下列问题和事实的发现而提出的：

本申请的发明人在对神经损伤进行研究的过程中，意外发现，通过对神经细胞的染色方法和高内涵分析的参数进行优化，能够有效地对神经细胞进行活细胞检验，并且能够有效地获得相关神经细胞的某些活细胞特征的细微变化，例如平均轴突长度、平均属兔长度和平均分支数等。

由此，本申请提出了一种能够有效地对神经细胞进行活细胞检验的方法及其应用。

在本申请的第一方面，本申请提出了一种对神经细胞进行活细胞检验的方法，根据本申请的实施例，该方法包括：(1)利用DPBS溶液，将神经细胞进行清洗，以便去除死细胞；(2)利用Hoechst，对所述神经细胞进行细胞核染色；(3)利用DPBS溶液，对经过细胞核染色的所述神经细胞进行清洗；(4)利用钙黄绿素，对所述神经细胞进行细胞质染色，以便得到核质着色的神经细胞；(5)采用高内涵分析系统，对所述核质着色的神经细胞进行神经细胞分析，以便确定所述神经细胞的活细胞特征。

根据本申请的实施例，通过采用上述方法，与传统的免疫荧光染色相比，能够极大的缩短染色的时间周期，并且能够更好地反映活细胞的实时状态，通过高内涵分析平台，也能够更精确地识别细胞数量和形态。利用钙黄绿素，对所述神经细胞进行细胞质染色，以便得到核质着色的神经细胞

根据本申请的实施例，在染色过程中，利用Hoechst，对所述神经细胞进行细胞核染色大约孵育5～15分钟，例如大约10分钟。利用钙黄绿素，对所述神经细胞进行细胞质染色，以便得到核质着色的神经细胞大约孵育5～15分钟，例如大约10分钟。另外，在染色过程中，草根

根据本申请的实施例，所述活细胞特征包括选自平均轴突长度、平均分支数、平均树突长度的至少之一。

根据本申请的实施例，所述神经细胞设置在多孔板中，例如96孔板、48孔板、24孔板、12孔板、6孔板、4孔板等。由此，可以在相同条件下设置多个重复孔，减少一次试验导致的误差，提高试验的成功率。

根据本申请的实施例，所述高内涵分析系统，在所述多孔板的每个孔中拍摄至少40个视野，例如49个视野。

根据本申请的实施例，所述神经细胞为SH－SY5Y细胞。

根据本申请的实施例，所述神经细胞经过冈田酸处理。