[发明专利]一种食源性致病菌洗脱方法

说明书

本发明公开了一种食源性致病菌洗脱方法，步骤为：1)配制洗脱液；2)洗脱液与样品按比例混合，放入无菌容器中孵育，收集洗脱溶液，洗脱液采用Tris·HCl缓冲溶液作为基础缓冲液，并通过加入蛋白胨、NaCl、纤维素酶、表面活性剂吐温20，增加拍打式均质机拍打，提高洗脱效率，本发明无需采取耗时的培养增菌方法，通过简单的操作让即食蔬菜污染到的食源性致病菌尽可能被洗脱下来，配合后续的检测方法，实现了食源性致病菌快速检测。

技术领域

本发明涉及食品安全领域，尤其涉及一种食源性致病菌的高效洗脱获取方法。

背景技术

随着社会的发展，营养均衡的观念逐渐深入人心，低脂、低热量、高膳食纤维的蔬菜广受关注，其中可鲜食蔬菜能最大程度的保留营养成分，而且菜肴制作简单，也越来越受青睐。生菜、苦菊、甘蓝、黄瓜、辣椒、洋葱、胡萝卜、香菜、罗勒、葱等蔬菜，不管是传统还是现代饮食都会存在不加热烹饪直接鲜食的情况，随着东西方文化的融合越来越多的鲜食蔬菜会融入现代生活。但对于鲜食蔬菜而言，不加热处理就有可能让食源性致病菌有可乘之机，危害人们健康。

传统的食源性致病菌检测方法均基于培养法，需要经过增菌、选择性培养基培养、生化鉴定等一系列的操作，往往需要4-7天，存在耗时长，且只能检测样品中存活的缺陷，对于高流通与高周转的鲜食蔬菜来说，存在较大的局限性；此外，快速检测方法的研究也一直是人们关注的热点，但现在的快速检测方法大多重视后端的检测，对于前端的致病菌洗脱等环节较少关注，如果在前端无法从复杂的样品中得到检测目标菌，则极易出现假阴性结果，其后的检测步骤无论多么灵敏都无济于事，会危害广大消费者安全。

因此迫切需要改进和提高即食蔬菜致病菌检测方法，实现无需增菌过程的快速检测，有效降低检测的假阴性率。

发明内容

有鉴于现有技术的上述缺陷，本发明所要解决的技术问题是前端无法从复杂的样品中得到检测目标菌，传统检测存在增菌过程耗时长的缺陷，本发明提供一种食源性致病菌洗脱方法，无需采取耗时的培养增菌方法，让食品污染到的食源性致病菌尽可能被洗脱下来，配合后续的检测方法，实现无需增菌的快速检测。

为实现上述目的，本发明采取以下技术方案：

一种食源性致病菌洗脱方法，包括以下步骤：

步骤1、配制洗脱液；

步骤2、洗脱液与样品按比例混合，放入无菌容器中孵育，收集洗脱液，作为待测液。

所述步骤1包括以下步骤：

步骤1.1、配制1-100mM Tris·HCl缓冲溶液作为基础缓冲液；

步骤1.2、在步骤1.1的基础缓冲液中加入蛋白胨、NaCl、表面活性剂吐温20，121℃灭菌15min；

步骤1.3、使用前加入用0.22μm的无菌滤膜过滤的纤维素酶溶液；

优选的，Tris·HCl缓冲溶液pH值为pH9～11。

优选的，蛋白胨添加量为0.005％-1％，NaCl添加量为0～3％，表面活性剂吐温20添加量0～0.5％。

优选的，纤维素酶溶液加入洗脱液后的终浓度为100～500U/L。

优选的，步骤1.2配制的洗脱液，可以配成10×～50×的母液，121℃灭菌15min后保存，在使用前稀释成工作液。

优选的，步骤2洗脱液与样品按质量比9：1的比例放入带滤网的容器中混合。

优选的，样品质量为10～25g。

优选的，孵育时间为室温下10～60min。