[发明专利]同步检测SGLV与YEZV双重荧光定量RT-PCR核酸组、试剂盒及方法

说明书

本发明涉及病毒检测领域，为解决现有现有技术下缺少SGLV、YEZV两种蜱传病毒的检测方法的问题，公开了一种用于同步检测SGLV与YEZV的双重荧光定量RT‑PCR核酸组、一种同步检测SGLV与YEZV的双重荧光定量RT‑PCR试剂盒和检测方法。本发明建立了一种同步检测SGLV与YEZV的方法，检测速度快，为患者的治疗争取了宝贵的时间，并且一次性检测两种病毒省时省力，试剂成本低，该检测方法灵敏度高、特异性好、可重复，能有效排除其他病毒的干扰，本发明的试剂盒使用方便，操作简单，检测结果可靠。

技术领域

本发明涉及病毒检测领域，尤其涉及一种同步检测SGLV与YEZV双重荧光定量RT-PCR核酸组、试剂盒及方法。

背景技术

蜱为人、家畜及野生动物的体外寄生虫，在叮咬宿主时会将其携带的多种病毒传染给宿主，导致宿主出现发热、头痛、脏器衰竭等临床症状。在传染病控制中，及时正确诊断最为关键，是有效治疗的基础也是制定正确预防策略的依据，蜱传病毒引起的疾病的临床表现特异性不强，对于此类疾病的早期诊断尚存在困难，因此建立一种快速、灵敏、特异，可同时对多种蜱传病毒进行鉴别诊断的检验方法具有重要意义。近日，研究人员又分离鉴定出两蜱传病毒——Songling virus(SGLV)以及Yezo virus(YZEV)，尚未有针对这两种病毒的可同时检测方法。

目前，用于蜱传病毒的检测方法主要有酶联免疫吸附测定(ELISA)，聚合酶链反应(PCR)、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、实时RT-PCR、二代测序(NGS)和第3代测序技术(Nanopore sequencing)等。ELISA是采用分离出未知病原体中的抗原与含有已知特异性抗体的免疫血清进行血清学反应，以此来确定病原体种类的一种技术，该方法完成时间相对较短且特异性强，缺点是在操作过程中可能出现假阳性反应，影响结果的判定，而且制备抗血清的时间较长且一次只能检测一种病毒，具有一定的局限性。PCR是一种在DNA酶的作用下对DNA进行特异扩增的技术，是实验室常用的检测方法，引物为一对上/下游特异性引物，此方法只能简单的对核酸进行检测，不能实时监控核酸扩增量。NGS以及第3代测序技术是将患者标本中大量的基因序列全部测定，将测序结果与Gen Bank上已有的病毒序列进行比对，以此来判定患者体内是否含有该病毒，此种方法费用昂贵，对仪器和实验室人员要求很高，不适合病毒的快速诊断。

发明内容

本发明为了克服现有技术下缺少SGLV、YEZV两种蜱传病毒的检测方法的问题，提供一组用于同步检测SGLV与YEZV双重荧光定量RT-PCR核酸，本发明还提供一种同步检测SGLV与YEZV双重荧光定量RT-PCR试剂盒及方法，该方法可同时检测SGLV、YEZV两种蜱传病毒，具有操作简单、实时快速、定性定量、特异敏感、重复性好、不易污染的优点。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一组用于同步检测SGLV与YEZV的双重荧光定量RT-PCR核酸，所述核酸包括SGLV引物对、YEZV引物对、SGLV荧光探针和YEZV荧光探针；

所述SGLV引物对包括SGLV上游引物和SGLV下游引物，SGLV上游引物的核苷酸序列如序列表中序列1所示，SGLV下游引物的核苷酸序列如序列表中序列2所示；

所述YEZV引物对中包括YEZV上游引物和YEZV下游引物，YEZV上游引物的核苷酸序列如序列表中序列3所示，YEZV下游引物的核苷酸序列如序列表中序列4所示；

所述SGLV荧光探针的核苷酸序列如序列表中序列5所示，SGLV荧光探针的5’端链接HEX荧光基团，3’端链接BQ1荧光猝灭基团；

所述YEZV荧光探针的核苷酸序列如序列表中序列6所示，YEZV荧光探针的5’端链接CY5荧光基团，3’端链接BQ2荧光猝灭基团。