[发明专利]一种粘着箭菌及其制备方法和在生产维生素B12

说明书

本发明公开了一种粘着箭菌及其制备方法和在生产维生素B₁₂中的应用，该粘着箭菌命名为粘着箭菌(Ensifer adhaerens)Nhu HG‑22，保藏编号为CGMCC No.23306，保藏日期为2021年8月27日。本发明提供了一种由出发菌粘着箭菌Nhu 015‑9经紫外诱变和氯化锂诱变处理后获得的诱变菌株，该诱变菌株不仅在发酵至144h左右达到了最大菌浓，比出发菌同时期的菌浓提高16.4％，而且比出发菌的对数期缩短2天，维生素B₁₂的发酵单位达到了251mg/L明显高于出发菌，其糖耗由1.18kg/g降低为1.05kg/g，甜菜碱消耗由0.21kg/g降低为0.16kg/g，大大降低了生产成本。

技术领域

本发明涉及发酵技术领域，尤其涉及一种粘着箭菌及其制备方法和在生产维生素B₁₂中的应用。

背景技术

维生素B₁₂为钴胺类化合物，维生素B₁₂又称钴铵素,它是一系列含有以钴原子为中心的咕啉核和以5,6-二甲苯并咪唑为碱基的核苷酸，并对人和动物具有生物活性的类咕啉同功维生素总称，主要活性品种有氰钴铵、羟钴铵、腺苷钴铵和甲钴铵。临床上，维生素B₁₂主要用于治疗恶性贫血，同时也用于治疗各种神经系统疾病和某些肝脏疾病等。

目前，用于维生素B₁₂的生产菌株，包括脱氮假单胞菌、费氏丙酸杆菌、苜蓿中华根瘤菌等，其中脱氮假单胞菌具有生长速度快、生产合成能力高和代谢生长过程中不产生内毒素和外毒素的优点，而被广泛应用于维生素B₁₂的工业发酵生产中。目前菌种选育的方法主要是自然选育、诱变选育和构建基因工程菌，其中自然选育的诱变效率较低，只能作为分离、纯化、复壮的工具，基因工程菌的构建具有目的性，但是操作过程较繁琐，并且容易退化，诱变育种随机性强，操作简单，因此诱变育种不失为一种不错的获得脱氮假单胞菌发酵生产维生素B₁₂高产菌的方法。

诱变育种的方法包括化学法和物理法。华北制药采用紫外线和5-嗅尿嘧啶复合诱变处理，选育到一株抗5-嗅尿嘧啶突变株5-BU-3-5，该菌株经摇瓶发酵，发酵单位较出发菌株提高了18％。中国专利CN102453690A采用甲磺酸乙酯和低能离子注入复合诱变，获得遗传性状稳定、发酵条件优良的菌株，与原始菌株相比，发酵单位提高8％～12％。中国专利CN109207469A采用紫外和ARTP复合诱变，最终获得遗传性质稳定、发酵水平较高的菌种，该菌株最终发酵单位达到315μg/mL，并且发酵至144h左右达到最大菌浓，比原始菌株同时期菌浓提高了16.5％；与另两种菌株相比，对数期由原先的120h左右，缩短至96h左右，为后期产维生素B₁₂奠定了基础。目前，现有技术中维生素B₁₂生产菌粘着箭菌的发酵水平仍有进一步提升的空间。

发明内容

本发明提供了一种粘着箭菌及其制备方法和在生产维生素B₁₂中的应用，该粘着箭菌由出发菌粘着箭菌Nhu 015-9经紫外诱变和氯化锂诱变处理后获得，获得的突变株不仅发酵菌株浓度大大提高，对数期缩短，而且维生素B₁₂的发酵单位也显著提高。

具体技术方案如下：

本发明提供了一种粘着箭菌，命名为粘着箭菌(Ensifer adhaerens)Nhu HG-22，保藏编号为CGMCC No.23306，保藏日期为2021年8月27日。

进一步地，上述粘着箭菌(Ensifer adhaerens)Nhu HG-22的生理学特性为杆状，革兰氏阴性菌，有鞭毛，运动，兼性需氧，菌落多为白色，粘稠，最适生长温度为28℃。

进一步地，上述粘着箭菌(Ensifer adhaerens)Nhu HG-22的16s RNA基因序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明还提供了一种上述粘着箭菌的制备方法，包括：