[发明专利]一种粘着箭菌及其制备方法和在生产维生素B12

权利要求书

1.一种粘着箭菌，命名为粘着箭菌(Ensifer adhaerens)Nhu HG-22，保藏编号为CGMCCNo.23306，保藏日期为2021年8月27日。

2.如权利要求1所述的粘着箭菌，其特征在于，所述粘着箭菌(Ensifer adhaerens)NhuHG-22的生理学特性为杆状，革兰氏阴性菌，有鞭毛，运动，兼性需氧，菌落多为白色，粘稠，最适生长温度为28℃。

3.如权利要求1所述的粘着箭菌，其特征在于，所述粘着箭菌(Ensifer adhaerens)NhuHG-22的16s RNA基因序列如SEQ ID NO.1所示。

4.一种如权利要求1～3任一项所述的粘着箭菌的制备方法，其特征在于，包括：

(1)取出发菌粘着箭菌Nhu 015-9，制成出发菌悬液；

(2)用紫外灯对出发菌悬液进行紫外诱变，得到诱变后的菌体，稀释诱变后的菌体，将菌体涂布于含氯化锂的无菌平皿中，进行恒温培养，得到突变菌体；

(3)对突变菌体依次进行斜面培养、种液培养、发酵培养后，根据发酵单位，确定初筛优势菌；

(4)对初筛优势菌进行多次复筛，挑选出典型诱变菌株，对每个典型诱变菌株进行逐一发酵摇瓶考察，选择发酵单位和菌浓均较高的菌种，得到高产维生素B₁₂的诱变菌株。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述紫外灯的波长为365nm，照射时间为50～70s，照射距离为20～30cm；稀释后的菌体浓度为1×10^-6～1×10^-7cfu/mL；所述无菌平皿中氯化锂的质量百分数为0.5～0.75％；恒温培养的温度为26～30℃，时间为7～8天。

6.如权利要求1～3任一项所述的粘着箭菌在生产维生素B₁₂中的应用。

7.一种生产维生素B₁₂的方法，其特征在于，包括：

(A)将如权利要求1所述的粘着箭菌(Ensifer adhaerens)Nhu HG-22接种至种子培养基中进行种子培养，得到种子液；

(B)将种子液接入发酵培养基中进行发酵培养，得到发酵液。

8.如权利要求7所述的生产维生素B₁₂的方法，其特征在于，所述种子培养的温度为28～30℃，转速为150-300rpm，时间为20～25h；

以种子培养基为基准，按质量百分数计，所述种子培养基的各组分为：糖蜜10％-12％，硫酸铵2.0％-2.5％，磷酸氢二铵0.5％-1.0％，一水硫酸锰0.1％-0.2％，七水硫酸镁1.2％-1.5％，七水硫酸锌0.5％-0.8％，其余为水，pH 7.0-7.5。

9.如权利要求7所述的生产维生素B₁₂的方法，其特征在于，所述发酵培养的温度为28～30℃，转速为150-300rpm；发酵培养至60h后控制溶氧处在20～30％之间，并在发酵培养至40h后开始添加补料培养基进行补料，发酵至菌体自溶严重，单位无明显提高时放罐；

以发酵培养基为基准，按质量百分数计，所述发酵培养基的各组分为：赤砂糖12％-15％，玉米浆2％-4％，磷酸氢二铵0.5％-1％，硫酸铵1％-2％，氯化钴0.03％，5,6-二甲基苯并咪唑0.1％-0.15％，甜菜碱2％-3％，七水硫酸镁2.0％-3.0％，碳酸钙1.0-1.5％，其余为水，pH 7.0-7.5。

10.如权利要求9所述的生产维生素B₁₂的方法，其特征在于，所述补料培养基以葡萄糖作为补料碳源，总糖浓度为100-200g/L。