[发明专利]一种四重重组酶聚合酶等温扩增法快速联检四种蚊媒病毒试剂盒

说明书

本发明公开了一种四重重组酶聚合酶等温扩增法快速联检四种蚊媒病毒试剂盒。包括一个以单重重组酶聚合酶等温扩增技术为基础的四重重组酶聚合酶等温扩增体系，针对登革热病毒、基孔肯雅热病毒、黄热病病毒、寨卡病毒基因的特异性正、反向引物和TwistAmp exo荧光探针，本发明可以简便快速地在一个反应管中同时、平行地检测包括登革热病毒、基孔肯雅热病毒、黄热病病毒、寨卡病毒四种临床难鉴别的蚊媒传染病病原体，实现了单管同时检测四种病毒，操作简单快速，灵敏度高，特异性、重复性好，结果准确可靠，对阻断传染源、鉴别DV、CV、YFV、ZV感染或混合感染、监测临床疗效均有很大的临床价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种四重重组酶聚合酶等温扩增法快速联检四种蚊媒病毒试剂盒，尤其涉及检测登革热病毒(Dengue Fever Virus，DV)、基孔肯雅热病毒(Chikungunya Fever Virus，CV)、黄热病病毒(Yellow Fever Virus，YFV)、寨卡病毒(ZikaVirus，ZV)的四重RT-RPA。应用本发明试剂盒，可在一个反应管中快速、平行地同时检测四种病毒(DV、CV、YFV、ZV)。

背景技术

蚊虫是地球上对人类健康危害最为严重的动物之一，作为疾病的传播媒介，主要可引起疟疾、登革热、黄热病、寨卡、基孔肯雅热等传染病的传播。这些蚊媒传染病分布范围广泛，虽然目前在我国已得到有效控制，但输入性病例呈快速上升趋势，近年来登革热等其他虫媒传染病的输入性病例也时有发生。

登革热病毒(Dengue Virus，DV)是登革热(Dengue fever，DF)、登革出血热(Dengue haemorrhagic fever，DHF)的病原体，DF临床表现以高热、头疼、肌肉关节疼痛为主，可伴有皮疹、淋巴结肿和白血球减少，少数病例会进展至突发出血—DHF，最严重的是以循环衰竭为特征的登革休克综合征(dengueshocksyndlone，DSS)。寨卡(Zika)是由寨卡病毒(Zika Virus，ZV)感染引起的病毒性疾病，主要表现为流感样症状，如发热、不适、头痛、肌肉疼痛、厌食、皮疹、乏力、眼眶痛、水肿、淋巴结病和腹泻等。基孔肯雅热(ChikungunyaFever)是一种由基孔肯雅病毒(Chikungunya Fever Virus)引起的病毒性疾病。该病的临床表现主要包括头痛、乏力、发热、恶心、呕吐、关节疼痛和肌肉痛等，很多症状与登革热相似，临床上常误诊为登革热。黄热病(Yellow Fever)是一种由黄热病毒(Yellow FeverVirus，YFV)引起病毒性出血热。大部分黄热病毒感染者临床表现较轻微，只有少部分感染者会出现急性期临床症状，主要包括寒战、发热、背痛、肌痛、恶心、呕吐和厌食等，约有1/6的急性期感染者会进入中毒期，主要表现为呕吐、反复发热、黄疸、倦怠、大出血及肾功能衰竭等。以上四种典型蚊媒传染病致死率较高，临床症状相似，给临床诊断和鉴别带来一定困难，因此快速同步对蚊媒传染病中四种临床难鉴定病原体(DV、CV、YFV、ZV)进行联合检测及鉴别诊断意义重大。

病毒性疾病的诊断主要依靠病原学诊断。近年来，除了传统的诊断方法，如血清学、病毒分离培养等外，分子生物学方法在病毒性疾病的诊断中得到了广泛应用。病毒分离法是一种传统的检测技术，其优点是可靠，缺点是操作繁琐，若作病毒型别鉴定，实验周期更长，现已极少用于临床；血清学诊断对先天性感染、免疫缺陷者感染并不敏感，有时有交叉反应和干扰现象，同时，血清学检测无法实现多种病毒同时检测，因此，血清学检测对病毒感染的诊断具有一定的局限性。随着分子生物学技术的发展，病毒的核酸检测方法进展飞快，检测方法基本都是基于PCR技术，但因其检测结果解读方法的差异，延伸出多种方法，如PCR-直接测序法、实时荧光PCR法、PCR基因芯片法等。但是，因为分子诊断对仪器场地人员等要求较高，限制了该技术的广泛应用。