[发明专利]一种四重重组酶聚合酶等温扩增法快速联检四种蚊媒病毒试剂盒

权利要求书

1.一种四重重组酶聚合酶等温扩增法快速联检四种蚊媒病毒试剂盒，其特征在于：由核酸提取液、四重RT-RPA反应液、阴性质控品、强阳性质控品、弱阳性质控品、五个浓度的阳性定量标准品组成，所述四种蚊媒病毒为：登革热病毒(DV)、基孔肯雅热病毒(CV)、黄热病病毒(YFV)、寨卡病毒(ZV)，所述四重RT-RPA反应液为特异性四重RT-RPA引物、特异性四重RT-RPA荧光探针、RT-RPA反应缓冲液、重组酶uvsX、重组酶uvsY、单链DNA结合蛋白、链置换DNA聚合酶以及WarmStart RTx逆转录酶构成的混合液，所述引物及其特异性荧光探针序列、标准品序列如下：

登革热病毒：

上游引物：F1：gcattcctaagatttctagccatacctccaacagc

F2：attcctaagatttctagccatacctccaacagc

F3：atttctagccatacctccaacagcaggaattttgg

下游引物：R1：ttttgaaaccccgtaacactttaatcgctcca

R2：gtcacagatctttttctcctgttcattatgttc

R3：gcatgaggagcatggtcacagatctttttctcctg

探针：aaccccgtaacactttaatcgctccattct[FAM-dt][THF][BHQ1-dt]tgaatgagccccatc[spacer c3]基孔肯雅热病毒：

上游引物：F1：attacccactttggactcagcagtattcaacg

F2：acacagatgagggaattacccactttggactca

F3：cgaaaaggaactgcaacgtcacacagatgaggg

下游引物：R1：tggcagcaaattcttcccagtattctcggtt

R2：ttgttagattctcagtcgttatcctgatagggc

R3：ttagtgacataggttgttagattctcagtcgtt

探针：actttggactcagcagtattcaacgtggag[ROX-dt][THF][BHQ1-dt]tttaaaaaattcgcat[spacer c3]黄热病病毒：

上游引物：F1：actactctgagcccacaagtgaagacaatgc

F2：tgctcctagacaacatggaggtgagaggtgggat

F3：ctgagcccacaagtgaagacaatgcgcatcatgt

下游引物：R1：tctcctctggtcatctcttagcctcatttcacct

R2：ccttctatgccataaagtggagcaaccatccca

R3：aagactctcctctggtcatctcttagcctcattt

探针：gaggtgagaggtgggatggttgctccactt[CY5-dt][THF][BHQ2-dt]ggcatagaaggaacaa[spacer c3]寨卡病毒：

上游引物：F1：aagcccttggattcttgaacgaggatcact

F2：tgaacgaggatcactggatggggagagagaac

F3：ctaggggctagatttttagagttcgaagccct

下游引物：R1：cctcctggtatgcgactcatctcttctaggaca

R2：cgactcatctcttctaggacatatccgagtct

R3：ccagcagtgtcatctgcatacatccttcctcc

探针：ctggatggggagagagaactcaggaggtgg[TAMRA-dt][THF][BHQ1-dt]tgaagggctgggatta[spacer c3]；

登革热病毒标准品序列：

ttctaacagt tttttattag agagcagatc tctgatgaac aaccaacgga aaaagacgggtcgaccgtct ttcaatatgc tgaaacgcgc gagaaaccgc gtgtcaactg tttcacagtt ggcgaagagattctcaaaag gattgctttc aggtcaagga cccatgaaac tggtgatggc ttttatagca ttcctaagatttctagccat acctccaaca gcaggaattt tggctagatg gggctcattc aagaagaatg gagcgattaaagtgttacgg ggtttcaaaa aagaaatctc aaacatgttg aacataatga acaggagaaa aagatctgtgaccatgctcc tcatgctgct

基孔肯雅热病毒标准品序列：

atccgtcaaa acttaggagc tacccgaaac aacatgctta tcacgcgccc tctatcagaagcgctgtacc ttccccattc cagaacacac tacagaatgt actggcagca gccacgaaaa ggaactgcaacgtcacacag atgagggaat tacccacttt ggactcagcagt attcaacgtg gagtgttttaaaaaattcgc atgcaaccga gaatactggg aagaatttgc tgccagccct atcaggataa cgactgagaatctaacaacc tatgtcacta aattaaaggg gccaaaagca gcagcgttgc ttgcaagaac ccataatctgctgccgctgc aggatgtacc aatggatagg ttcacagtag atatga aa

黄热病病毒标准品序列：

agaatacccc acaattaaac agaaaaaacc tgatttcatc ttggccactg acatagctgagatgggagcc aatctctgtg tggagagagt gttggattgt aggacggctt tcaaacctgt gcttgtggatgaagggagaa aggtggcaat aaaagggcca ctccggattt cagcttcctc cgctgcccaa aggagggggcgcattggaag gaaccctaac agagacggag attcatacta ctactctgag cccacaagtg aagacaatgcgcatcatgtc tgctggcttg aggcctcaat gctcctagac aacatggagg tgagaggtgg gatggttgctccactttatg gcatagaagg aacaaagaca ccagtttccc caggtgaaat gaggctaaga gatgaccagaggagagtctt

寨卡病毒标准品序列：

tgagaggaga gtgccagagt tgtgtgtaca acatgatggg aaaaagagaa aagaaacaaggggaatttgg aaaggccaag ggcagccgcg ccatctggta tatgtggcta ggggctagat ttttagagttcgaagccctt ggattcttga acgaggatca ctggatgggg agagagaact caggaggtgg tgttgaagggctgggattac aaagactcgg atatgtccta gaagagatga gtcgcatacc aggaggaagg atgtatgcagatgacactgc tggctgggat acccgcatca gcaggtttga tctagagaat gaagctctaa tcaccaaccaaatggagaaa gggcacaggg ccttggcatt ggccataatc aagtacacat accaaaacaa agtggtaaaggtccttagac。