[发明专利]一种LncRIM基因的检测试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种LncRIM基因的检测试剂盒及其应用，本发明LncRIM基因检测试剂盒灵敏性好，简单易操作，在科学实验中具有良好的适应性和实用性。本试剂盒提供2对检测引物同时使用，相比传统只使用1对检测引物大大减少结果的随机性，更具统计学意义，结果更加准确可靠；试剂盒内的检测引物具有很高的灵敏度，仅需少量样本即可完成筛查；本试剂盒可用于细胞铁代谢的监测，结果客观有效，可将细胞铁代谢水平转化为量化指标，便于统计研究。

(一)技术领域

本发明涉及一种检测LncRIM核酸表达水平的试剂盒及其应用。

(二)背景技术

铁是人体中必需微量元素，机体每天从食物中摄取大概1-2mg的铁离子维持基本的生理代谢平衡。机体中铁缺乏会引起遗传性缺铁性贫血症，而铁离子过多则与多种癌症(如结肠癌、直肠癌、肝癌、乳腺癌等)的发生发展密切相关。

细胞内铁离子含量检测通常以Calcein-AM试剂盒、铁离子探针等方式进行。Calcein-AM试剂盒可以通过量化的手段准确地反映细胞内铁离子水平，但其所需的巨大的时间与人力成本进行细胞计数且步骤繁琐为研究人员带来了诸多不便；铁离子探针较前者略显简便，但相对而言使用成本较高。优化检测方法已然成为实时监控细胞生长状态的当务之急，一种高效、便捷、准确的细胞生长状态检测手段将为研究人员进行细胞生物学研究提供强有力的支持。

分子标记是以个体间遗传物质内核苷酸序列变异为基础的遗传标记，在基因定位、基因克隆、基因库构建和遗传育种等方面广泛应用。相比于其他几种遗传标记方法，分子标记具有具高灵敏度、高特异性、可量化的优点。随着分子生物学技术的发展，分子标记的用途逐渐被广泛接受。因此，筛选合适的分子标记物对检测细胞内铁离子含量具有重要的意义。

LncRIM(Long non-coding RNA related to iron metabolism)，是一个在人体基因组内稳定表达的基因，其通过信号通路调控细胞内铁离子代谢水平，LncRIM的表达量与细胞内铁离子含量具有明显的正相关。以样品RNA为模板，选择LncRIM检测引物与内参引物进行RT-qPCR反应，按照2^ΔΔCq计算相对丰度，该数值反映了实验细胞或组织中LncRIM的转录活跃水平，即可判断细胞铁离子水平。

基于上述理论，本发明开发了一个LncRIM基因检测试剂盒，

(三)发明内容

本发明提供一种LncRIM基因的检测试剂盒及其应用，该试剂盒内包含了两对LncRIM表达水平检测引物，一对B2M内参引物。该试剂盒可用于所培养细胞系铁离子水平检测，具有高特异性，稳定性，灵敏性的特征，具有极大的潜在应用价值。只需少量病例样本，按照所提供的方法进行检测，即可对机体内铁离子含量做出检测进而对铁代谢异常诊断特别是临床乳腺癌的发生及预后效果诊断提供依据。该试剂盒为乳腺癌的术前精确诊断、预后准确评估乳腺癌的转移提供了新的高灵敏，高特异性的分子检测标志，具有很高临床应用价值。

本发明采用的技术方案是：

本发明提供一种LncRIM基因检测试剂盒，所述试剂盒包括LncRIM基因的检测引物和内参引物；所述检测引物为LncRIM F#1/LncRIM R#1、LncRIM F#2/LncRIM R#2中的一组或两组；

所述检测引物：

LncRIM F#1:5’-CTCAAACTTCACTAGCCCCGT-3’；

LncRIM R#1:5’-GAATGGGATGGGAGGACACA-3’；

LncRIM F#2:5’-TCAAACTTCACTAGCCCCGT-3’；

LncRIM R#2:5’-AGTGAGGAGAATGGGATGGGA-3’；