[发明专利]一种检测奇异变形杆菌的LAMP检测试剂盒

说明书

本发明公开了一组检测奇异变形杆菌的引物组，所述引物组由一对外引物、一对内引物和一条环引物组成，所述外引物中正向置换引物F3的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，反向置换引物B3的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，所述内引物中正向内引物FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，反向内引物BIP的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示，所述环引物LB的核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示。基于上述引物和环介导等温扩增检测技术开发出的一种检测奇异变形杆菌的LAMP检测试剂盒，实现了快速高效、操作简便、高特异性、高灵敏度和鉴定简便的检测目的。

技术领域

本发明涉及分子生物学检测技术领域，具体地，涉及一种检测奇异变形杆菌的LAMP检测试剂盒。

背景技术

奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)是变形杆菌属(Proteus)的一种主要病原菌，常存在于人粪便中，会引起肠源性尿路感染。随着广谱抗生素的使用越来越广泛，变形杆菌已成为重要的条件致病菌，会引起人类的严重感染，包括医源性感染，严重时会造成死亡。普通变形杆菌和奇异变形杆菌与临床关系较密切，奇异变形杆菌和普通变形杆菌是仅次于大肠埃希菌引起的泌尿系统感染的主要病原菌，肾结石和膀胱结石的形成也可能与变形杆菌感染有关，有的变形杆菌可引起败血症、食物中毒、腹膜炎和脑膜炎等。奇异变形杆菌主要污染动物性食品，特别是肉类，因此应加大对动物性食品中奇异变形杆菌的监测力度，保障消费者的食用安全。

目前检测奇异变形杆菌通常采用传统的菌分离和生化反应鉴定，操作复杂，耗时较长，不适应日常食品卫生检测监督工作的需要。分子生物学方法如PCR、多重PCR和实时荧光PCR等广泛应用于食源性致病菌的检测，克服了传统检测方法的不足。但是PCR、多重PCR、实时荧光PCR等方法需使用昂贵的仪器设备作为实验支撑，检测成本相对较高，且反应过程需要升降温，导致该检测技术不能很好的应用于广大基层单位。因此，亟待研究开发一种快速准确、性价比高、恒温且易于广大基层单位操作的分子检测方法，为广大基层单位检测动物性食品中奇异变形杆菌提供新的选择。

环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)能在等温条件下，短时间内进行核酸扩增，是一种简便、快速、精确和低价的基因扩增方法。它克服了传统PCR、实时荧光定量PCR和微滴式数字PCR等PCR检测方法反复升降温且检测周期相对较长的缺点。现有技术中检测奇异变形杆菌的L AMP方法，特异性不高，且后续实验步骤繁琐。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术中存在的不足，提供一组检测奇异变形杆菌的引物组，所述引物组由一对外引物、一对内引物和一条环引物组成，所述外引物中正向置换引物F3的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，反向置换引物B3的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，所述内引物中正向内引物FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，反向内引物BIP的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示，所述环引物LB的核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示。

本发明通过环介导等温扩增技术(LAMP)，用Bst DNA聚合酶和根据特定靶序列设计引物，特异性识别靶序列上的独立区域，启动循环链置换反应，实现恒温条件下的连续快速扩增。基于上述引物和环介导等温扩增检测技术开发出的一种检测奇异变形杆菌的LAMP检测试剂盒，实现了快速高效、操作简便、高特异性、高灵敏度和鉴定简便的检测目的，从而可以向广大基层用户推广使用，能够提升对动物性食品中奇异变形杆菌的监测力度，保障消费者的食用安全。

本发明的第一个目的是提供一组检测奇异变形杆菌的引物组。

本发明的第二个目的是提供所述的检测奇异变形杆菌的引物组在制备检测奇异变形杆菌检测试剂盒中的应用。

本发明的第三个目的是提供一种奇异变形杆菌的检测试剂盒。

为了实现上述目的，本发明是通过以下方案予以实现的：