[发明专利]一种SNHG6基因的检测试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种SNHG6基因检测试剂盒及其应用，所述试剂盒由样品RNA提取试剂、cDNA逆转录试剂、SNHG6引物、GAPDH内参引物和荧光定量PCR反应液组成；本发明提供了一种灵敏性好、特异性强、使用少量样本即可方便快捷地监测肝癌细胞增值状态的试剂盒；本试剂盒可将肝癌细胞增殖状态转化为量化指标，结果客观有效，便于统计研究；本试剂盒提供了2对SNHG6检测引物，能够有效减少检测结果的随机性，提高检测结果统计准确性。

(一)技术领域

本发明涉及一种检测lncRNA SNHG6核酸表达水平，指示肝癌细胞恶性增殖状态的试剂盒及其应用。

(二)背景技术

细胞增殖是生物体繁殖和发育的基础，是细胞重大生命活动之一。为确保细胞增殖这一生命过程严格有序进行，细胞内发展了一系列调控机制对该过程进行严密监控。癌细胞由于高频率基因突变，以及基因表达模式改变，逃离了细胞增殖监控机制的制约，表现出细胞增殖失控的特征。因此，监测与细胞增殖异常相关基因的表达水平变化，是一种高效、便捷、准确指示肿瘤恶性进展程度的方法。

原发性肝癌是全球第四大癌症相关死亡原因，其发病率逐年上升。由于缺乏准确有效的早期诊断方法和预后生物标志物，肝癌的死亡率居高不下。因此，筛选合适的分子标志物，用于指示肝癌细胞的生长状态，作为肝癌恶性增殖状态的诊断依据，具有极高的应用前景与研究价值。

SNHG6(small nucleolar RNAhost gene 6)，是一个在肝癌细胞中稳定表达的基因，其通过介导原癌信号通路激活，促进肿瘤细胞的恶性增殖。并且，SNHG6在肝癌中高表达与患者癌症复发、不良预后呈显著正相关。因此，以细胞或病人样本RNA为模板，选择SNHG6检测引物与内参引物进行实时荧光定量PCR检测反应，按照2^ΔΔCq计算相对丰度，该数值反映了肿瘤细胞或组织中SNHG6的转录活跃水平，即可判断肝癌细胞的生长情况，作为肝癌细胞增殖状态的辅助诊断依据。

基于上述理论，本发明开发了一个基于SNHG6分子标记的肝癌诊断试剂盒，按照所提供的方法对肝癌病理样本进行检测，即可对临床肝癌的发生及预后效果诊断提供依据。该试剂盒为肝癌的术前精确诊断、评估肝癌的复发及预后提供了新的分子检测标志，具有较高的临床应用价值。

(三)发明内容

本发明提供一种SNHG6基因的检测试剂盒及应用，该试剂盒内包含内参引物，以及两对SNHG6表达水平检测引物，用于辅助指示肝癌恶性增殖状态。该试剂盒具有高特异性，稳定性，灵敏性的特征，能够准确指示肝癌细胞的生长状态，用来辅助诊断肝癌患者的不良预后，具有极大的潜在应用价值。

本发明采用的技术方案：

本发明提供一种SNHG6基因检测试剂盒，所述试剂盒由样品RNA提取试剂、cDNA逆转录试剂、SNHG6引物、GAPDH内参引物和荧光定量PCR反应液组成；所述SNHG6引物为SNHG6F#1/SNHG6 R#1或SNHG6 F#2/SNHG6 R#2中的一组或两组；

所述引物序列如下：

GAPDH F：5’-AATGGGCAGCCGTTAGGAAA-3’；

GAPDH R：5’-GCGCCCAATACGACCAAATC-3’；

SNHG6 F#1：5’-GTTAGTCATGCCGGTGTGGT-3’；

SNHG6 R#1：5’-AATACATGCCGCGTGATCCT-3’；

SNHG6 F#2：5’-GCTCTGCGAGGTGCAAGAA-3’；

SNHG6 R#2：5’-ATGCTGCATGCCACACTTGA-3’。