[发明专利]表达G2型猪流行性腹泻病毒S/S1的猪繁殖与呼吸综合征嵌合病毒及其应用

说明书

本发明涉及一种表达G2型猪流行性腹泻病毒S/S1的猪繁殖与呼吸综合征嵌合病毒及其应用，属于兽用生物制品技术领域。本发明提供两株重组表达G2型PEDV流行株S或S1基因的PRRSV嵌合病毒。基于PRRSV天然弱毒株感染性克隆平台构建的这两株嵌合病毒，均可诱导猪体同时产生抵抗PEDV和PRRSV的中和抗体。这些嵌合病毒可作为活载体疫苗候选株，用于研制同时抵抗PEDV和PRRSV流行株的新型基因工程疫苗。本发明涉及两株重组表达G2型PEDV流行株S或S1基因的PRRSV嵌合病毒的构建与拯救。这些嵌合病毒为有效防控PED和PRRS疫情提供了新型疫苗候选株和关键技术支持,同时抵抗PEDV和PRRSV流行株的基因工程活疫苗的成功研制可以实现“一针两防”，具有巨大经济价值和良好的市场前景。

技术领域

本发明涉及表达G2型猪流行性腹泻病毒S/S1的猪繁殖与呼吸综合征嵌合病毒及其应用，属于兽用生物制品技术领域。

背景技术

猪流行性腹泻(PED)是严重危害全球养猪业的烈性传染病。临床上能引起仔猪腹泻，呕吐，脱水和代谢性酸中毒等症状。其病原体猪流行性腹泻病毒(PEDV)为单股正链RNA病毒，属于冠状病毒科阿尔法冠状病毒属(CoV-α)。PEDV可以感染所有年龄猪，10日龄内仔猪感染后发病率和死亡率都可达到100％。疫苗免疫是防控PED的有效方法，然而，现有PEDV商品化疫苗(包含灭活疫苗以及基于G1型毒株的弱毒疫苗)无法为2010年以来出现的新型PEDV变异株(G2型)提供足够的交叉保护力。猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)同样给全球养猪业造成巨大经济损失。临床上主要引起母猪繁殖障碍和仔猪呼吸系统综合征。其病原体猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)为单股正链RNA病毒，属于动脉炎病毒科(Arteriviridae)。PRRSV是目前已知变异最快的RNA病毒之一，然而，现有商品化疫苗无法提供抵抗新型流行株的良好交叉保护。

纤突蛋白(Spike,S)是PEDV的主要跨膜蛋白。S蛋白一般可分为2个结构域：S1和S2。S1(1-789氨基酸)为高突变区，可识别并与特异性受体结合。S2(790-1383氨基酸)为保守区，主要与细胞膜融合。S蛋白主要位于病毒表面，可与细胞上的受体结合，并通过膜融合的方式使病毒进入宿主细胞。同时，S蛋白含有至少四个中和表位，在刺激宿主产生中和抗体诱导保护性免疫应答中起重要作用。因此，S蛋白常作为PED基因工程疫苗研制的靶标抗原。

反向遗传操作技术已成为新型基因工程疫苗研制的重要方法。为减轻当前猪群多种病原疫苗免疫压力，利用PRRSV反向遗传操作技术研制同时防控PED和PRRS的基因工程活疫苗，实现“一针防两病”具有重要意义。但相关研究尚未有报道。

发明内容

针对目前缺乏同时有效防控我国PEDV和PRRSV流行株的商品化疫苗问题，本发明提供两株重组表达G2型PEDV流行株S或S1基因的PRRSV嵌合病毒。这两株嵌合病毒接种猪体均可同时诱导PEDV和PRRSV的中和抗体，为研制国内外首个PEDV重组PRRSV基因工程活载体疫苗，实现“一针两防”，提供了疫苗候选株。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种重组载体，用于构建表达G2型猪流行性腹泻病毒S蛋白的猪繁殖与呼吸综合征嵌合病毒，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

一种重组载体，用于构建表达G2型猪流行性腹泻病毒S1蛋白的猪繁殖与呼吸综合征嵌合病毒，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

表达G2型猪流行性腹泻病毒S/S1基因的猪繁殖与呼吸综合征嵌合病毒，利用如权利要求1或2所述重组载体所拯救构建。

在本发明的一个方面，提供了重组表达G2型PEDV流行株S或S1蛋白的HP-PRRSV 嵌合病毒。这两株嵌合病毒不仅包含全长HP-PRRSV天然弱毒株JSTZ1712-12的全基因序列，还包含G2型PEDV流行株XJ1904-34(GenBank登录号：OL348059)的S或者S1基因。