[发明专利]表达G2型猪流行性腹泻病毒S/S1的猪繁殖与呼吸综合征嵌合病毒及其应用

权利要求书

1. 一种重组载体，用于构建表达G2型猪流行性腹泻病毒S蛋白的猪繁殖与呼吸综合征嵌合病毒，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2. 一种重组载体，用于构建表达G2型猪流行性腹泻病毒S1蛋白的猪繁殖与呼吸综合征嵌合病毒，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.表达G2型猪流行性腹泻病毒S或S1蛋白的猪繁殖与呼吸综合征嵌合病毒，其特征在于，所述嵌合病毒系利用如权利要求1或2所述重组载体所拯救构建。

4.权利要求3所述表达G2型猪流行性腹泻病毒S或S1蛋白的猪繁殖与呼吸综合征嵌合病毒的构建方法，其特征在于，所述方法如下：

以HP-PRRSV天然弱毒株感染性克隆rJSTZ1712-12为活病毒载体，利用同源重组或者双酶切连接方法在其ORF1b和ORF2a基因之间插入G2型PEDV流行株XJ1904-34的S或S1基因序列，构建拯救表达G2型PEDV流行株S或S1蛋白的PRRSV嵌合病毒。

5. 根据权利要求4所述表达G2型猪流行性腹泻病毒S或S1蛋白的猪繁殖与呼吸综合征嵌合病毒的构建方法，其特征在于，所述HP-PRRSV天然弱毒株感染性克隆rJSTZ1712-12载体，包含HP-PRRSV JSTZ1712-12分离株基因组全长cDNA序列，该全长cDNA序列的5’端加有巨细胞病毒真核启动子序列，3’端Poly(A)尾下游加有丁肝炎病毒核酶序列以及牛生长激素多聚腺苷酸信号转录终止序列；所述rJSTZ1712-12载体是以pACYC177低拷贝载体为框架，在pACYC177载体上插入四个单一限制性酶切位点PacI , AflII , AscI和NotI，用于构建天然弱毒株JSTZ1712-12的感染性克隆。

6.根据权利要求4或5所述的构建方法，其特征在于，所述的方法包括如下步骤：

1）PEDV-S和PEDV-S1基因扩增；

2）rJSTZ1712-12-S或rJSTZ1712-12-S1重组质粒的构建；

3）rJSTZ1712-12-S或rJSTZ1712-12-S1嵌合病毒拯救。

7.权利要求3所述嵌合病毒在制备猪流行性腹泻-猪繁殖与呼吸综合征基因工程疫苗中的应用。