[发明专利]一种非诊断目的的基因定位方法

说明书

本发明公开了一种非诊断目的的基因定位方法，适用于不同形态的DNA，所述不同形态的DNA包括环形单链DNA和线性双链DNA，具体操作步骤包括：首先通过PCR将环形单链的DNA变成双链DNA以及将线性双链的DNA变成合适长度的双链DNA，加入限制性核酸内切酶消化后得到具有“缺口”的DNA链，再加入三嵌段引物与DNA连接酶，从而得到所需模板，最后加入DNA折纸探针，利用PCR退火使得模板捕获到游离的DNA折纸探针，经过原子力显微镜表征达到可视化的基因定位。本发明的基因定位的方法可以对6‑7个碱基进行放大定位，具有更高的精确性，同时本方法具有生物样本多态性、高分辨、可视化、快速检测的优点。

技术领域

本发明属于检测分析及生物学应用领域，具体涉及一种非诊断目的的基因定位方法。

背景技术

在遗传学上，遗传标记手段主要包括根据物种形态性状的区别进行形态标记和利用同工酶进行生化标记，其本质都是针对染色体上的基因进行定位，基因定位（Genemapping）是基因组测序、病原菌鉴定等领域中的重要手段，具体是指基因所属连锁群或染色体以及基因在染色体上的位置的测定，基因定位是遗传学研究中的一项基本工作，其目的不仅在定位染色体上的基因片段，而且还在于测定基因在染色体上线性排列的顺序和距离。

基于以上标记手段得到的结果都间接反映在表现型的差异，近几十年中，现代分子生物学技术蓬勃发展，一种新兴的遗传标记技术正日渐成熟，那就是 DNA 分子标记。DNA分子标记是一种根据基因片段碱基序列的差异直接反映个体间差异的遗传标记手段，与传统遗传标记手段相比，具有以下优势：

（1）跨越表型特征，直接体现遗传物质上的变异；

（2）可标记的基因位点极多，核酸序列差异明显；

（3）对遗传性状的选择不受影响。

因此，在DNA纳米技术领域，定位DNA链上具有相同序列的基因片段，实则是一种DNA分子标记过程。利用荧光分子实现DNA分子标记是基于DNA纳米技术的一种应用技术。目前，现有技术中主要是利用核酸内切酶作用于单分子DNA，再通过 DNA 聚合酶发挥作用并携带荧光分子标记在特定位点并在全内置反射荧光显微镜下观察，或采用DNA 折纸探针的特异性标记并且在原子力显微镜下直接可视化观察，用不同的限制酶处理同一DNA分子，通过对酶切产生的DNA片段的大小和位置的分析，可以绘制出某一DNA分子的限制图谱。

但是，目前上述物理图谱法必须在严格控制的变性条件下每一种DNA分子具有变性环的特定分布形式，才能构成部分变性图，从而对基因组的序列进行检测，因此现有的基因定位方式存在定位的时间较长、费用昂贵、操作复杂等问题。

发明内容

为克服现有技术的不足，本发明提供一种非诊断目的的基因定位方法，可适用于不同形态DNA上的基因定位，且解决现有基因定位存在的成本高、耗时长、精确度低的问题。

一种非诊断目的的基因定位方法，包括以下步骤，其中，步骤S2和步骤S3过程如图1所示：

步骤S1：设计上下游引物，加入DNA聚合酶经PCR扩增出目标序列，所述目标序列来自生物体或人工合成的双链DNA或单链DNA，目标序列不仅限于单一的生物体DNA以及同类型的DNA形态；

对于双链DNA，设计合适的上下游引物，加入DNA聚合酶经PCR扩增出所需序列；所述DNA聚合酶优选La Taq DNA聚合酶；

对于环形单链DNA，在环形单链DNA中加入部分互补的DNA序列，加入DNA聚合酶，经PCR扩增成一个环形双链DNA；所述DNA聚合酶优选为Vent(exo-) DNA聚合酶；