[发明专利]一种检测粮食储存环境气溶胶中的霉菌监测粮食霉变的新方法及应用在审
| 申请号： | 202111488805.1 | 申请日： | 2021-12-08 |
| 公开（公告）号： | CN114381541A | 公开（公告）日： | 2022-04-22 |
| 发明（设计）人： | 郑秋月;杨爱馥;曹际娟;黄大亮;梁冰 | 申请（专利权）人： | 大连民族大学;大连海关技术中心 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12N15/11;C12Q1/686;C12Q1/04;C12R1/67;C12R1/68;C12R1/645 |
| 代理公司： | 大连格智知识产权代理有限公司 21238 | 代理人： | 刘晓琴 |
| 地址： | 116600 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 粮食 储存 环境 气溶胶 中的 霉菌 监测 霉变 新方法 应用 | ||
1.一种检测粮食储存环境气溶胶中的霉菌监测粮食霉变的新方法，其特征在于，包括如下步骤：在验证了粮食储存环境的气溶胶中霉菌组分与同一环境下的已污染霉菌的粮食参考样品中的霉菌数量和种类具有正相关性基础上；通过采集粮食环境中的微生物气溶胶，根据气溶胶中霉菌培养计数结果和实时荧光PCR方法检测结果，判断粮谷及其制品中霉菌污染情况。
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于：所述采集粮食环境中的生物气溶胶是通过生物气溶胶自动监测仪采集；且采用GB/T4789.15-2016和GB/T4789.16-2016方法进行霉菌计数和种类鉴定。
3.根据权利要求1所述方法，其特征在于：所述利用检测气溶胶中霉菌监测粮食霉变的方法还包括如下步骤：将收集到的气溶胶采集液，采用霉菌琼脂培养基30℃培养5d，进行霉菌计数。
4.根据权利要求1所述方法，其特征在于：所述霉变样品同一环境中气溶胶中产毒素霉菌主要包括黄曲霉、烟曲霉、禾谷镰刀菌、轮枝镰刀菌、赭曲霉。
5.根据权利要求1所述方法，其特征在于：所述利用实时荧光PCR技术检测气溶胶中霉菌的方法还包括如下步骤：将收集到的气溶胶采集液置于30℃培养过夜，用0.45μm的无菌滤膜过滤，将微生物富集到无菌滤膜上；采用CTAB法或霉菌DNA提取试剂盒提取滤膜上霉菌总DNA作为检测模板。
6.根据权利要求1所述方法，其特征在于：所述荧光PCR方法采用的引物和荧光探针如SEQ ID NO.1-15所述。
7.根据权利要求1所述方法，其特征在于：所述实时荧光PCR反应体系，每25μL反应体系中包含：2×PremixExTaqTM 12.5μL，10μmol/L正向引物0.5μL，10μmol/L的反向引物0.5μL，5μmol/L荧光探针1μL，RoxPeference DyeⅡ0.5μL，100μg/mL模板DNA 2μL，灭菌双蒸水8μL。
8.根据权利要求1所述方法，其特征在于：实时荧光PCR反应条件：95℃预变性10s，1个循环；95℃变性5s，60℃退火/延伸34s；40个循环，荧光阈值为设备默认值。
9.如权利要求1所述方法在检测粮谷及制品中霉菌污染的应用，其特征在于：包括对粮谷及制品中霉菌污染的早期预警，预防控制粮谷及制品中霉菌及其毒素的危害。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：包括应用于粮食储存或者装卸、出仓、入仓、中转、加工场所。
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