[发明专利]一种同时检测六种水稻病毒的试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种同时检测六种水稻病毒的试剂盒及其应用，属于农业技术领域。所述试剂盒包括：用于检测水稻锯齿叶矮缩病毒RRSV的引物组、用于检测水稻条纹病毒RSV的引物组、用于检测水稻矮缩病毒RDV的引物组、用于检测南方水稻黑条矮缩病毒SRBSDV的引物组、用于检测水稻黑条矮缩病毒RBSDV的引物组、用于检测水稻草状矮化病毒RGSV的引物组。本发明的试剂盒可以方便快捷可靠的同时检测6种水稻病毒，既节省了检测成本，又可快速得到结果，减少工作量，可进行细致而深入的病毒病学研究，为更好的研究水稻田间病害的发病和传毒介体的带毒率，为病害的测报和防控提供了有利抓手，为大规模突发性病毒病暴发时病因的溯源打下了良好的技术基础，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明属于农业技术领域，具体涉及一种同时检测六种水稻病毒的试剂盒及其应用。

背景技术

水稻(Oryza sativa L.)是世界上一半人口的主食来源。水稻病毒病作为农业生产上的重要病害之一，在我国、日本、韩国、印度、菲律宾、越南等国家以及非洲水稻产区普遍发生(Uehara-Ichiki et al.,2013a)。水稻病毒不仅仅侵染水稻，还侵染玉米，小麦等禾本科植物，寄主范围广；其次，水稻新老病毒轮番发生，新的病毒不断被发现，老的病毒潜伏发生，由于水稻抗病毒免疫品种缺乏，水稻病毒病尚不能有效彻底的控制，始终威胁着农业生产，带来了极大的安全隐患并造成重大的经济损失。

目前世界报道的水稻病毒有17种，在我国发生过的有12种之多。当前在生产上能够采到的有水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)、水稻草状矮化病毒(Rice grassystunt virus, RGSV)、水稻矮缩病毒(Rice dwarf virus,RDV)、水稻锯齿叶矮缩病毒(Riceragged stunt virus, RRSV)、水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)、南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)、水稻瘤矮病毒(Rice gall dwarf virus, RGDV)和水稻条纹花叶病毒(Rice stripemosaic virus,RSMV)等8种水稻病毒病害。这些水稻病毒的感染大多会引起水稻植株的矮化，分蘖增多，叶色浓绿卷曲，叶片僵直等相似的病害症状，然而，当同一水稻植株上出现多种不同症状表现时，很难通过病害症状来进行诊断。

在南方水稻产区RDV、RSV、SRBSDV、RRSV、RGSV、RBSDV常年发生混合侵染，早期侵染症状相似，这极其容易导致病毒的误诊。快速精准诊断对于有效预防和控制侵染初期的病害流行具有重要意义，如果出现判断错误，很有可能影响生产实践，因此有必要建立一种可快速高效精准检测多种病毒的PCR体系。每种水稻病毒都包含一个dsRNA或ssRNA 基因组。RDV、SRBSDV、RBSDV和RRSV包含10-12个片段的dsRNA(Hibino,1996)，RSV 和RGSV包含4-6条ssRNA基因组，其病毒的序列同源性均有差异。SRBSDV和RBSDV是同源性最高的，它们最保守的成分(片段1，2和10)有78.5％–79.2％相似度(Wang et al.,2010)。其他几种病毒基因组与SRBSDV和RBSDV的基因组有显著差异。因此，根据这些病毒的基因组序列差异设计每种病毒的特异引物，建立一种同时检测这6种病毒的方法，对于监测传毒介体带毒、病害流行等生产实践具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种同时检测六种水稻病毒的试剂盒及其应用。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种同时检测六种水稻病毒的试剂盒，包括：用于检测水稻锯齿叶矮缩病毒RRSV的引物组、用于检测水稻条纹病毒RSV的引物组、用于检测水稻矮缩病毒RDV的引物组、用于检测南方水稻黑条矮缩病毒SRBSDV的引物组、用于检测水稻黑条矮缩病毒RBSDV的引物组、用于检测水稻草状矮化病毒RGSV的引物组；