[发明专利]一种显性孔雀石绿半抗原的合成方法及其半抗原的应用

说明书

本发明提供一种显性孔雀石绿半抗原的合成方法及其半抗原的应用，包括如下步骤：4‑甲酰基苯硼酸和丙烯酸在铑催化下偶联，得到3‑（4‑甲酰基‑苯基）‑丙酸，该化合物在氯化锌存在下与N，N‑二甲基苯胺反应，得到隐性孔雀石绿半抗原，在通过四氯对苯醌氧化得到显性孔雀石绿半抗原，该半抗原与载体蛋白偶联即得到显性孔雀石绿人工抗原。实验结果表明，采用本发明的抗原免疫动物产生的抗体特异性高，灵敏度高，得到抗血清效价可达10⁶，检测限为0.1ug/L。

技术领域

本发明涉及一种显性孔雀石绿半抗原的合成方法及其半抗原的应用，属于生物化工技术领域。

背景技术

孔雀石绿又名碱性绿、孔雀绿和中国绿，是带有金属光泽的绿色结晶体，化学名称为四甲基代二氨基三苯甲烷，易溶于水、甲醇和乙醇，溶液呈蓝绿色。孔雀石绿是一种人工合成的三苯基甲烷类工业燃料，主要用于制陶、纺织、皮革和食品等产业上的颜色剂和细胞化学上的染色剂。孔雀石绿具有杀菌、杀虫等功效，被广泛用作驱虫剂和杀虫剂，以杀灭水产动物体外的寄生虫，原生动物和鱼卵中的霉菌等。

CN103012193A公开了一种孔雀石绿半抗原、人工抗原及其制备方法，保留孔雀石绿的特征结构，在孔雀石绿结构的不同化学位点衍生出具有不同垫子云密度、不同碳链长度以及适合于大分子载体偶联的活性手臂。由隐色孔雀石绿半抗原制备得到孔雀石绿人工抗原，应用于检测隐色孔雀石绿和孔雀石绿的残留量。

CN108640850A公开了一种孔雀石绿半抗原、人工抗原及其在荧光定量免疫层析中的应用，半抗原结构中同时具有两个孔雀石绿分子的结构，使得半抗原在载体蛋白中的空间位置更加突出，增加了识别位点，有效的提高了小分子半抗原的免疫原性，也提高了人工抗原的效价，人工抗原制备的荧光定量免疫层析试纸条的检测方法，其检测灵敏度可达0.2ug/L。

现有产品中，其抗体特异性与灵敏度较弱，不能满足现有需求。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的第一目的在于提供一种显性孔雀石绿半抗原的合成方法。

本发明的第二目的在于提供采用上述合成方法得到的显性孔雀石绿半抗原制备显性孔雀石绿人工抗原的方法。

本发明的第三目的在于提供上述显性孔雀石绿人工抗原的应用。

为了实现第一目的，本发明是通过如下的技术方案来实现：一种显性孔雀石绿半抗原的合成方法，包括如下步骤：

S1：以4-甲酰基苯硼酸和不饱和酸为原料合成化合物A；

A

S2：化合物A在氯化锌存在下与N，N-二甲基苯胺反应得到化合物B；

B

S3：化合物B通过四氯对苯醌氧化得到显性孔雀石绿半抗原；

。

采用上述技术方案，将4-甲酰基苯硼酸和丙烯酸在铑催化下偶联，得到3-（4-甲酰基-苯基）-丙酸，该化合物在氯化锌存在下与N，N-二甲基苯胺反应，得到显性孔雀石绿半抗原。

优选的，步骤S1具体为：将4-甲酰基苯硼酸、丙烯酸和二聚合羟基（1,5-环辛二烯）铑（I）溶于纯水中，体系置换为Ar保护，75℃搅拌反应16-24h得到化合物A。

优选的，步骤S1中的4-甲酰基苯硼酸、丙烯酸和二聚合羟基（1,5-环辛二烯）铑（I）的摩尔比为1：0.4-1：0.01。

优选的，步骤S2具体为：化合物A、氯化锌和N，N-二甲基苯胺按照摩尔比1：3-3.5：3-3.5在无水乙醇中加热至90℃反应24h得化合物B。