[发明专利]基于纳米孔测序平台的RNA病毒宏转录组建库方法及应用有效
| 申请号： | 202111473132.2 | 申请日： | 2021-12-02 |
| 公开（公告）号： | CN114277092B | 公开（公告）日： | 2023-03-24 |
| 发明（设计）人： | 周水莲;潘吾思;戴岩;李振;童桢开;李诗濛;任用 | 申请（专利权）人： | 江苏先声医疗器械有限公司;江苏先声诊断技术有限公司;江苏先声诊断医疗器械有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12Q1/6869;C40B50/06 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 210042 江苏省南京*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 纳米 孔测序 平台 rna 病毒 转录 组建 方法 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种RNA病毒宏转录组建库方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
1）样本去宿主DNA步骤；
2）核酸提取步骤；
3）cDNA合成步骤；
4）cDNA富集步骤；
5）人源rRNA剔除步骤；
6）文库构建步骤；
所述1）样本去除宿主DNA步骤为不完全去除宿主DNA步骤：采用DNase对样本进行不完全去除宿主DNA；所述DNase添加量为26U-260U；
所述2）核酸提取步骤中采用Zymo_D7021进行RNA病毒提取；
所述4）cDNA富集步骤采用单引物等温扩增法主动富集cDNA；
所述单引物等温扩增法为SPIA等温扩增法；
所述5）采用探针法去除人源rRNA；所述探针法包括杂交捕获步骤和特异性核酸酶处理步骤；
所述样本包括但不限于：肺泡灌洗液样本、痰液样本和脑脊液样本；
所述RNA病毒宏转录组是基于纳米孔测序平台的RNA病毒宏转录组；
所述6）文库构建步骤中，采用PCR-free 建库上机试剂盒。
2.权利要求1所述建库方法在RNA病毒宏转录组测序中的应用，所述应用为非疾病诊断应用。
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