[发明专利]耐盐碱番茄叶内生菌、发酵液、制备方法及应用

说明书

本发明涉及植物培育技术领域，公开了耐盐碱番茄叶内生菌，所述耐盐碱番茄叶内生菌命名为李斯特拟诺卡氏菌BFY2‑1，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号，保藏编号为CCTCC M 20211324，保藏日期为2021年10月26日；还公开了耐盐碱番茄叶内生菌的筛选纯化方法、发酵液的制备方法及应用。本发明筛选出来的菌株具有耐盐碱功能，喷施BFY2‑1菌株发酵液能够促进盐碱环境中番茄的生长，当BFY2‑1菌株发酵液的OD值为0.1时，该BFY2‑1菌株将受盐碱胁迫的番茄种子的发芽率提高了14.3％；盆栽实验中对番茄植株叶面喷施该BFY2‑1菌株发酵液，番茄的株高提高了13％，鲜重提高了17％，本发明的BFY2‑1菌株在大棚设施番茄的生产方面具有很好的应用前景。

技术领域

本发明涉及植物培育技术领域，具体涉及耐盐碱番茄叶内生菌、发酵液、制备方法及应用。

背景技术

随着设施农业的快速发展，化肥的过量施用造成了大面积的土壤次生盐渍化，盐渍土或碱土是土壤中可溶性盐类或代换性钠离子浓度达到一定程度后，土壤的pH值较高，作物难以生长的一类土壤。盐碱化使土壤理化性质变差，使作物根系难以吸收水分和投入肥料中的营养物质，引起生理干旱和营养缺乏症，导致作物生长发育遭受盐害而受到抑制，从而对植物生长产生负面影响，造成盐渍土中种植的作物(植物)缺苗、植株生长减弱、减产、甚至绝产，而提高植物的耐盐性是解决次生盐渍化的方法之一。

因为通过微生物的方法提高植物的耐盐性不会造成二次污染，因此其成为领域内的研究热点。近年来，植物内生菌倍受关注，发明人的前期研究证实番茄叶内生菌对土壤盐渍化程度有显著影响，通过有益菌的添加，可能改善叶片菌群组成，提高菌群多样性；而且内生菌代谢产物大多具有生物学活性，如抗菌、抗病毒等作用，因此可提高植物对盐碱的耐受性，促进植物生长，在农业中具有广阔的应用前景。目前还未见关于从番茄叶中分离得到内生李斯特拟诺卡氏菌的文献报道，也没有关于番茄叶内生菌发酵液有耐盐碱、植物促生作用的研究报道，因此，发明人研发了耐盐碱番茄叶内生菌、发酵液、制备方法及应用。

发明内容

基于以上问题，本发明提供耐盐碱番茄叶内生菌、发酵液、制备方法及应用，本发明的耐盐碱番茄叶内生菌的发酵液可提高盐碱地番茄种子的发芽率和生长效率。

为解决以上技术问题，本发明提供了耐盐碱番茄叶内生菌，所述耐盐碱番茄叶内生菌命名为李斯特拟诺卡氏菌BFY2-1，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号，保藏编号为CCTCC M 20211324，保藏日期为2021年10月26日。

为解决以上技术问题，本发明还提供了耐盐碱番茄叶内生菌的筛选纯化方法，具体步骤如下：

(1)清洗消毒

在无菌操作台内，采集盐碱土中生长的番茄新鲜叶片，用灭菌超纯水洗涤30s，70％乙醇灭菌2min，5％次氯酸钠灭菌5min，70％乙醇清洗30s，灭菌超纯水润洗5次；

(2)富集培养

将经步骤(1)处理之后的新鲜番茄叶，在无菌离心管中用灭菌的镊子捣碎，然后将捣碎的番茄叶接种于含盐碱液体牛肉膏蛋白胨固体培养基中，含盐碱液体牛肉膏蛋白胨固体培养基的组成如下：牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，水1000ml，pH：9，NaCl含量1％，Na₂SO₄含量5％；接种后在28℃恒温培养箱下培养4天；

(3)平板涂布分离纯化

吸取步骤(2)中培养后的菌液0.1mL，用无菌水进行梯度稀释后涂布于含盐碱的营养平板中，营养平板的组成如下：牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，琼脂15-25g，水1000ml，pH：9，NaCl含量1％，Na₂SO₄含量5％；涂布后置于28℃恒温培养箱中培养4天，之后挑取营养平板上的菌，在新的上述营养平板上通过反复划线的方法纯化，直到得到纯的单菌落。