[发明专利]一种天然提取物抑制唾液菌群产臭的验证方法

说明书

本发明公开了一种天然提取物抑制唾液菌群产臭的验证方法，方法包括以下步骤：1)样品的制备：以口臭患者口腔采集的唾液或导致口臭的相关菌株为原料，制成一定浓度的菌悬液；2)天然提取物的制备；3)采集产生的气体：取步骤1)的样品置于离心管中，加入步骤2)制备的天然提取物，混匀，放入杜氏小管，置于恒温培养箱中培养；4)测试产生的气体中挥发性含硫化合物的含量：将步骤3)培养后的样品及对照取出，抽取收集的气体，注入气相色谱仪中分析判断气体中挥发性含硫化合物的含量。本申请扩大对于天然提取物抑制唾液菌群产臭的验证范围；对验证方法进行简化，使其更适用于实验室中筛选抑制唾液菌群产臭的天然提取物。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种天然提取物抑制唾液菌群产臭的验证方法。

背景技术

口臭是指呼吸时散发出的不良气味。导致口臭的气体主要有挥发性含硫化合物(VSCs)，如硫化氢、甲基硫醇和二甲基硫醚,此外还有挥发性芳香烃复合物，如吲哚、甲基吲哚，有机酸如乙酸、丙酸，胺类如尸胺、腐胺等有机物也可引起口臭。一些研究显示，口臭患者口腔内的菌群微生物种类及需氧、厌氧菌数量均较正常人高，常见的导致口臭的菌株有具核梭杆菌、牙龈卟啉单胞菌，普雷沃氏菌、克雷伯氏菌等，它们可以通过组织酶降解口腔内含硫的蛋白及多肽(主要为蛋氨酸,胱氨酸及半胱苷酸)来产生VSCs。目前用于治疗口臭的方式主要有益生菌治疗、天然提取物、疫苗治疗。

目前，对于验证天然提取物对唾液菌群产臭的抑制作用主要通过抑菌环实验验证该天然提取物对于某些特定的与口臭有关的菌株是否有抑制作用，以及选择患者在使用含有该天然提取物(如咀嚼片、含漱液、牙膏)的产品再进行口气值的测定。

但是，采用抑菌环实验只能验证天然提取物对部分特定的与口臭有关菌株的抑制作用，缺乏整体性；采用测定口气值的方法会受到使用产品中其他成分的影响，并且因该方法较耗费人力财力不适用于实验室对于能改善口臭的天然提取物的初步筛选。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种天然提取物抑制唾液菌群产臭的验证方法，其克服了现有技术的上述缺陷。

本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：

一种天然提取物抑制唾液菌群产臭的验证方法，包括以下步骤：

1)样品的制备：以口臭患者口腔采集的唾液或导致口臭的相关菌株为原料，制成具有一定浓度的菌悬液，待用；

2)天然提取物的制备：对天然物进行提取，得天然提取物；

3)采集唾液菌群产生的气体：取步骤1)的样品9ml置于离心管中，加入步骤2)制备的天然提取物1ml，混匀，放入杜氏小管，放置于37℃恒温培养箱中培养1-7d，得测试样品；以步骤1)的样品为阳性对照，以无菌水或无菌液体培养基为阴性对照；

4)测试产生的气体中挥发性含硫化合物的含量：将步骤3)培养后的测试样品、阳性对照以及阴性对照取出，采用注射器抽取杜氏小管中所收集的气体，快速注入便携式气相色谱仪中进行分析，判断气体中挥发性含硫化合物的含量。

优选地，上述技术方案中，步骤1)的菌悬液的制备具体为：

以口臭患者口腔采集的唾液为样品，将采集的唾液在0.5h内采用无菌水稀释到浓度为2×10⁶CFU/ml，备用；或者

采用厌氧液体培养基或营养肉汤培养基活化测试菌株；取新鲜培养物，用厌氧液体培养基或营养肉汤培养基制成浓度为2×10⁶CFU/ml的菌悬液。

优选地，上述技术方案中，步骤1)中的相关菌株为具核梭杆菌、牙龈卟啉单胞菌，普雷沃氏菌或克雷伯氏菌中的一种或多种。

优选地，上述技术方案中，步骤2)具体为：