[发明专利]一种用于快速检测马疱疹病毒8型的荧光定量PCR试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于快速检测马疱疹病毒8型的荧光定量PCR试剂盒，属于病毒检测技术领域，该试剂盒包括荧光定量PCR反应液2×SYBR qPCR Mix、用于检测靶多核苷酸的荧光探针、用于扩增靶多核苷酸的上游引物以及下游引物；其中，所述用于检测靶多核苷酸的荧光探针具有SEQ ID No.1所示的序列；本发明通过从患病马属动物采集鼻液、血液或流产组织样本，能够快速准确的进行EHV‑8病原检测，适用于规模化马场和驴场EHV‑8定性定量检测，可以快捷的对临床样本中马疱疹病毒8型感染情况进行监测，该试剂盒具有定量准确、检测速度快、灵敏度高、特异性好、稳定性高的特点。

技术领域

本发明涉及病毒检测技术领域，特别是涉及一种用于快速检测马疱疹病毒8型的荧光定量PCR试剂盒。

背景技术

马疱疹病毒(EHV)感染马属动物主要导致上呼吸道粘膜炎症、流产、神经症状等，该病毒在世界范围内给马属动物造成的危害巨大。目前，EHV有9个亚型(分别为EHV-1～9)，其中，EHV-1～5的自然宿主为马，而驴是EHV-6～8(又名为asinine herpesvirus 1～3，AHV1～3)的自然宿主。EHV不同亚型感染的临床表现也有较大差异，其中，EHV-1主要引起母马流产，EHV-4引起幼驹鼻肺炎，很少发生流产。EHV-8又名驴疱疹病毒3型(asinineherpesvirus 3，AHV-3)，马、驴对该病毒均易感，患病马或驴主要表现为发热、初期流出大量浆状鼻液，后期转变为脓性鼻液，鼻粘膜、眼结膜出现广泛充血症状，孕马或驴易发生流产和产下弱驹，弱驹的死亡率高达70％，另外，个别马属动物出现严重的脑脊髓炎等神经性症状。该病毒给养马业和养驴业造成巨大的经济损失，严重威胁相关产业的可持续发展。

近年来，随着养驴业的升温，驴产品(阿胶、驴肉、驴奶)的需求不断增强，驴产业已成为特色畜牧业，伴随着规模化养驴在国内不同地区出现，驴群的疫病不断增加，尤其是呼吸系统疾病和孕驴流产已成为困扰驴产业的重大难题。国内外研究人员前期分别从患呼吸道疾病和流产的马和驴的体内分离到EHV-8。我们研究团队先后从驴群的鼻拭子和流产胎盘组织分离到EHV-8野毒株，证明EHV-8是驴群呼吸道疾病和流产的主要致病原。随后经流行病学调查发现，北方3省(山东省、河北省、河南省)驴群中EHV-8感染平均阳性率为19.7％，其中，EHV-8阳性的规模化驴场为69.3％(52/75)，个别规模化驴场流产病例中EHV-8检出率高达53％。患病驴/马和康复带毒驴/马是本病的主要传染源。由于马疱疹病毒不同亚型之间的核苷酸序列的同源性较低仅为25％，同时鉴于目前市场上仅有马疱疹病毒I型(EHV-1)和IV型(EHV-4)核酸检测试剂盒和ELISA试剂盒(INGENASA，西班牙生产，货号:14.HVE.K.1/2)，且试剂盒自身存在较大缺陷，不能鉴别EHV-1、EHV-4和EHV-8的感染，另外，鉴于EHV-8与EHV-1、EHV-4在血清学上具有交叉免疫反应，造成现存商品化试剂盒检测结果特异性差，同时存在灵敏度低、假阳性、耗时、依赖进口花费高昂等缺点。同时，鉴于EHV-8在规模化驴场的流行率高，是导致当前驴场孕驴流产和呼吸道疾病的主要致病原，给驴产业造成巨大的经济损失。因此亟待开发精确、灵敏、快速、低成本的临床快速检测EHV-8检测方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于快速检测马疱疹病毒8型的荧光定量PCR试剂盒，以解决上述现有技术存在的问题，该试剂盒定量准确、检测速度快，且特异性好，灵敏度高，可鉴定区别马疱疹病毒8型。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种用于快速检测马疱疹病毒8型的荧光定量PCR试剂盒，所述试剂盒包括用于检测靶多核苷酸的荧光探针、用于扩增靶多核苷酸的上游引物以及下游引物；其中，所述用于检测靶多核苷酸的荧光探针具有SEQ ID No.1所示的序列。

进一步地，所述用于扩增靶多核苷酸的上游引物具有SEQ ID No.2所示的序列，所述下游引物具有SEQ ID No.3所示的序列。