[发明专利]检测人间充质干细胞影响T细胞增殖活性试剂盒及方法

权利要求书

1.检测人间充质干细胞影响T细胞增殖活性的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：整合了荧光素酶基因的T淋巴细胞、荧光底物和人间充质干细胞。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光素酶基因的核苷酸序列如SEQID NO.1所示。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括整合了荧光素酶基因的T淋巴细胞的培养基和人间充质干细胞培养基。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括酶标板。

5.一种检测人间充质干细胞抑制T细胞增殖能力的方法，包括以下步骤：

制备携带荧光素酶基因的慢病毒，将所述携带荧光素酶基因的慢病毒感染T淋巴细胞，得到整合了荧光素酶基因的T淋巴细胞；

将整合了荧光素酶基因的T淋巴细胞与人间充质干细胞共培养，加入荧光底物，测定荧光值，计算人间充质干细胞对T淋巴细胞的抑制率。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述慢病毒包括携带荧光素酶基因的Lenti-EF1a-luciferase-puro慢病毒载体。

7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于，所述慢病毒中还含有PGK启动子和嘌呤霉素抗性基因。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述整合了荧光素酶基因的T淋巴细胞与人间充质干细胞共培养的数量比为(1～10)：1。

9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述共培养包括：培养人间充质干细胞贴壁并增殖至55～65％，加入整合了荧光素酶基因的T淋巴细胞共培养96h。

10.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，按照以下公式计算人间充质干细胞对T淋巴细胞的抑制率：抑制率＝[(C-A)-(D-B)]/(C-A)×100％；其中，A为整合了荧光素酶基因的T淋巴细胞的培养基组的荧光值平均值，B为人间充质干细胞组的荧光值平均值，C为整合了荧光素酶基因的T淋巴细胞组的荧光值平均值，D为整合了荧光素酶基因的T淋巴细胞与人间充质干细胞共培养组的荧光值平均值。