[发明专利]新型转座子突变株文库的构建系统、新型转座子突变文库和应用

权利要求书

1.一种用于构建突变株文库的转座子系统，其特征在于：构建步骤如下：

（1）模仿天然的转座子质粒，人工构建一个在pUCP20转座子质粒的基础上利用转座子区域替换pUCP20转座子质粒中的LacZα基因的转座子质粒载体，转座子区域包括受到Plac调控的转座酶ISRP10、反向末端重复序列ITRs和庆大霉素抗性基因；

（2）该转座子区域的转座酶ISRP10能够受到Lac启动子基因的调控；

（3）先将构建的转座子质粒通过电化学转化法转到铜绿假单胞菌PAK中，获得一个含有转座子的转座子突变株；

（4）扩增培养一个转座子突变株，在细胞数达到10¹¹ cfu/mL时，添加终浓度为1 mM的IPTG，诱导培养2 h使转座子跳跃，随机获得全基因组范围内多种插入基因形式的转座子突变株文库；

所述步骤⑴中转座子质粒载体的核苷酸序列为SEQ ID NO.5。

2.根据权利要求1所述的用于构建突变株文库的转座子系统，其特征在于：所述pUCP20转座子质粒的核苷酸序列为SEQ ID NO.1。

3.根据权利要求1所述的用于构建突变株文库的转座子系统，其特征在于：所述转座酶ISRP10的核苷酸序列为SEQ ID NO.3。

4.根据权利要求1所述的用于构建突变株文库的转座子系统，其特征在于：所述步骤⑴中转座子区域的核苷酸序列为SEQ ID NO.4。

5.如权利要求1至4任一项所述的系统在铜绿假单胞菌插入突变株文库构建中的应用。