[发明专利]TrkA的抗体及其应用

说明书

本发明提出了一种能够特异性识别TrkA的抗体或其抗原结合片段及其用途。该抗体含有选自下列至少之一的CDR序列或与其具有至少95％同一性的氨基酸序列：重链可变区CDR序列：SEQ ID NO:1～27，轻链可变区CDR序列：SEQ IN NO:28～54。根据本发明实施例的上述抗体能够特异性的靶向结合TrkA受体，阻断NGF和TrkA结合。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地，本发明涉及TrkA的抗体及其应用，更具体地，本发明涉及能够特异性识别TrkA的抗体或其抗原结合片段、核酸分子、表达载体、重组细胞、药物组合物、制药用途、检测TrkA的试剂盒以及小鼠B细胞。

背景技术

目前临床上对于轻至中度疼痛，主要使用非阿片类镇痛药，如非甾体类抗炎药(NSAIDs)；对于中至重度疼痛，主要使用阿片类镇痛药。然而，NSAIDs存在“封顶效应”，阿片仅能使不到30％的非肿瘤性慢性疼痛得到有效缓解，20％的癌痛患者存在阿片类药物耐药。此外，NSAIDs存在胃肠道和心血管安全性隐患，长期用药过程中尤其明显。对于阿片类镇痛药，多年的药物改进实验未能有效的降低其成瘾性和其它诸多副作用，患者期许新的更安全有效的药物。

神经生长因子(NGF，nerve growth factor)参与疼痛的病理生理过程，主要通过结合高亲和力的酪氨酸激酶(tyrosine-nase，TrkA)受体激活NGF/TrKA信号通路，影响炎症介质的释放、离子通道的开放以及促进神经纤维的生长，从而参与疼痛的发生，传导以及增敏过程。研究表明，阻断NGF-TrkA信号通路可以有效的缓解疼痛和痛觉过敏，NGF-TrkA信号通路是开发新型镇痛药物的有效靶点。对于NGF-TrkA靶点镇痛药物，目前在研的药物主要分为两大类：大分子抗NGF单克隆抗体和小分子TrkA激酶抑制剂。由于TrKA受体并不是NGF的唯一受体，NGF还存在一种低亲和力的受体P75，而NGF与P75的结合对于神经系统的功能以及损伤修复是有重要作用的，大分子抗NGF单克隆抗体作为一种新型的镇痛药物存在很大的安全性隐患。从目前的临床数据来看，最常见毒副作用包括骨组织坏死(潜在)、感官异常等。而小分子TrkA激酶抑制剂存在着更多的问题。首先，小分子药物的半衰期一般较短，给药频繁，病人的依从性差。其次，小分子Trka激酶抑制剂是受体酪氨酸激酶抑制剂，机体内存在多种受体酪氨酸激酶，因此，药物对于特定靶点的特异性和选择性很难保证，药物的不良反应多，毒副作用大。

因此，针对NGF-TrkA靶点的镇痛药物，仍然需要科研工作者不断的开发和改进。

发明内容

本申请是基于发明人对下列问题和事实的发现而提出的：

NGF-TrkA信号通路作为开发新型镇痛药物的有效靶点，如果通过TrkA单克隆抗体选择性的靶向结合TrkA受体，不仅可以阻断NGF对TrkA信号通路的激活，有效的抑制疼痛信号的传递，又不会发生像抑制NGF受体所造成的诸多神经毒性，以及使用抗NGF抗体过度中和NGF所带来的骨关节坏死等不可预测的毒副作用。但由于TrkA分子是受体膜蛋白，筛选阻断型抗TrkA单克隆抗体的难度比较大，其次，设计阻断TrkA受体抗体存在由于抗体介导免疫反应导致的安全性风险，因此，设计开发针对TrkA的单克隆抗体难度比较大。

然而本申请的发明人却成功地筛选到了一种新型的具有长效镇痛作用的抗TrkA单克隆抗体，同时，发明人通过选取特定的Fc亚型并对其进行改造有效避免了免疫毒性的风险。具体地，本研究通过杂交瘤技术筛选出一系列阻断NGF和TrkA结合的高亲和力抗TrkA单克隆抗体，并将鼠源抗TrkA单克隆抗体的恒定区人源化，保留鼠源抗TrkA单克隆抗体的可变区，得到一系列的抗TrkA嵌合单克隆抗体。发明人发现，本申请所获得的这些嵌合抗体候选物，不仅能够特异性的靶向结合TrkA受体，阻断NGF和TrkA结合，有效的抑制疼痛，而且具有免疫毒性低，基本没有抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用(ADCC)的特点。