[发明专利]一种猪繁殖与呼吸综合征突变病毒及其构建方法与应用

说明书

本发明涉及病毒基因工程技术领域，具体地，涉及一种猪繁殖与呼吸综合征突变病毒RvJXwn‑nsp1β‑VS19GG，并进一步公开其构建方法与应用。本发明所述猪繁殖与呼吸综合征突变病毒RvJXwn‑nsp1β‑VS19GG，利用反向遗传操作技术，通过将高致病性PRRSV毒株JXwn06在非结构蛋白nsp1β的第19位缬氨酸和20位丝氨酸均突变为甘氨酸，进而构建得到所需突变病毒。所述突变病毒不仅遗传性状稳定，并且由于关键氨基酸位点的突变明显改变了亲本毒株诱导炎症反应的能力，使得所述突变病毒感染宿主细胞诱导强烈炎症反应，可以作为疫苗研发的候选毒株，为设计增强细胞免疫疫苗提供新的思路。

技术领域

本发明涉及病毒基因工程技术领域，具体地，涉及一种猪繁殖与呼吸综合 征突变病毒RvJXwn-nsp1β-VS19GG，并进一步公开其构建方法与应用。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndromevirus，PRRSV)属于套式病毒目、动脉炎病毒科β-动脉炎病毒属成员，是一 种有囊膜、不分节、单股正链的RNA病毒，基因组全长15kb。PRRSV所致 疫病称之为猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome， PRRS)，以妊娠母猪繁殖障碍(流产、死胎和木乃伊等)、各年龄段猪呼吸障 碍和仔猪高死亡率为主要临床症状，严重危害世界养猪业。

已有报道表明，PRRSV具有免疫抑制与逃逸的生物学特性，这也是导致 现有疫苗不能产生清除性免疫，引起病毒持续性感染，并诱发继发感染的重要 原因，也是猪繁殖与呼吸综合征防控的最大难题之一。据研究显示，PRRSV 非结构蛋白nsp1β是病毒拮抗宿主免疫反应的重要蛋白，而鉴定nsp1β功能发 挥的关键氨基酸位点，一方面助于解析PRRSV免疫逃逸的机制，另一方面可 以为PRRSV疫苗的研发提供新的设计思路。

反向遗传操作技术是研究病毒蛋白功能和构建减毒疫苗候选株的重要工 具，随着反向遗传操作技术的建立与发展，使对RNA病毒基因组在其cDNA 分子水平上进行人工操作成为可能，如对基因进行点突变、缺失、插入、颠换、 转位和互补等改造。目前，反向遗传操作技术已用于分析和研究PRRSV的基 因结构与功能、病毒RNA合成的调控机制、致病机制，并为新型疫苗的研究 提供技术保障。

公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解， 而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员 所公知的现有技术。

发明内容

本发明的目的在于提供一种猪繁殖与呼吸综合征突变病毒RvJXwn- nsp1β-VS19GG，该突变病毒遗传性状稳定，感染宿主细胞可诱导强烈炎症反 应。

本发明的另一目的在于提供上述猪繁殖与呼吸综合征突变病毒RvJXwn- nsp1β-VS19GG的构建方法与应用。

为实现上述目的，本发明提供了一种猪繁殖与呼吸综合征突变病毒，所述 突变病毒为在非结构蛋白nsp1β基因编码区第19位缬氨酸和20位丝氨酸均 突变为甘氨酸的重组突变病毒。

具体的，所述突变病毒在非结构蛋白nsp1β基因编码区第19位和第20位 氨基酸位点处的核苷酸序列均为GGC。

优选的，所述猪繁殖与呼吸综合征病毒为JXwn06毒株突变病毒，所述突 变病毒记为RvJXwn-nsp1β-VS19GG。

本发明还公开了一种猪繁殖与呼吸综合征病毒载体，所述病毒载体包含 所述猪繁殖与呼吸综合征突变病毒。

本发明还公开了所述猪繁殖与呼吸综合征突变病毒的构建方法，即针对 高致病性PRRSV JXwn06毒株的非结构蛋白nsp1β的关键氨基酸第19位缬氨 酸和20位丝氨酸进行甘氨酸突变，获得重组质粒，具体包括如下步骤：