[发明专利]治疗苯丙酮尿症的工程益生菌及其构建方法与应用有效
| 申请号： | 202111347505.1 | 申请日： | 2021-11-15 |
| 公开（公告）号： | CN113969292B | 公开（公告）日： | 2023-07-07 |
| 发明（设计）人： | 付加芳;曹广祥;马欣;王杰;林赓 | 申请（专利权）人： | 山东第一医科大学（山东省医学科学院） |
| 主分类号： | C12N15/60 | 分类号： | C12N15/60;C12N15/31;C12N15/113;C12N1/21;C12N15/74;A61K35/747;A61K38/51;A61K48/00;A61K9/00;A61P3/00;C12R1/23 |
| 代理公司： | 济南圣达知识产权代理有限公司 37221 | 代理人： | 李筝 |
| 地址： | 250117 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 治疗 丙酮 工程 益生菌 及其 构建 方法 应用 | ||
1.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体为包含苯丙氨酸氨裂合酶基因（phenylalanine ammonia-lyase，PAL）核苷酸序列、蛋白质分泌加工结构域编码基因prtP核苷酸序列和嗜酸乳杆菌组成型启动子SL的表达载体；
所述苯丙氨酸氨裂合酶基因PAL来源于
所述蛋白质分泌加工结构域编码基因prtP来源于
所述嗜酸乳杆菌组成型启动子SL来源于
将蛋白质分泌加工结构域基因prtP和苯丙氨酸氨裂合酶基因PAL基因置于嗜酸乳杆菌组成型启动子SL下游。
2.如权利要求1所述的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体一由苯丙氨酸氨裂合酶基因PAL核苷酸序列、蛋白质分泌加工结构域编码基因prtP核苷酸序列、嗜酸乳杆菌组成型启动子SL和pORI28载体连接得到。
3.一种治疗苯丙酮尿症的工程益生菌，其特征在于，所述工程益生菌选自含有权利要求1所述重组表达载体的嗜酸乳杆菌；
所述嗜酸乳杆菌选择嗜酸乳杆菌NCFM。
4.一种构建权利要求3所述工程益生菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将蛋白质分泌加工结构域基因prtP和苯丙氨酸氨裂合酶基因PAL置于嗜酸乳杆菌组成型启动子SL下游；
（2）采用常规分子生物学技术将上述基因片段连接到pORI28载体；
（3）以嗜酸乳杆菌NCFM为底盘菌，通过同源重组方法将上述基因整合到基因组上，获得蛋白质分泌加工结构域基因prtP和苯丙氨酸氨裂合酶基因PAL整合菌株；
采用全基因合成方法合成启动子SL、基因prtP和基因PAL。
5.权利要求1所述的重组表达载体或权利要求3所述的工程益生菌在制备苯丙酮尿症治疗药物中的应用；
所述药物是固体剂型，给药方式为口服给药。
6.一种药物组合物，其特征在于，其包括权利要求3所述的工程益生菌以及药学上可以接受的辅料。
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