[发明专利]一种筛选物种文库酵母菌株耐盐基因的方法

说明书

本发明涉及耐盐基因筛选技术领域，且公开了一种筛选物种文库酵母菌株耐盐基因的方法，包括以下材料：pYES2‑NTB载体、酵母完全培养基与酵母缺陷型筛选培养基、贮备液、氯化钠溶液，一种筛选物种文库酵母菌株耐盐基因的方法，包括文库构建、将空载质粒转化受体菌INVSc1、将物种文库转化受体菌INVSc1、盐浓度筛选、结果分析，筛选出的阳性克隆在SG‑U、SG‑U+1.5M NaCl均能正常生长，通过基因文库的构建然后将空载质粒转化受体菌INVSc1与物种文库转化受体菌INVSc1与盐浓度筛选，通过阴性对照：pYES2‑NTB，阴性对照在SG‑U平板上能正常生长，而在SG‑U+1.5M NaCl不能生长，从而得到耐盐基因，在实验过程中准确控制实验的温度与各种条件，该方法具有较高的全面性，通过对照实验使得实验数据跟更加具有权威性。

技术领域

本发明涉及耐盐基因筛选技术领域，具体为一种筛选物种文库酵母菌株耐盐基因的方法。

背景技术

植物耐盐基因工程，土壤盐渍化是农业生产面临的最主要的生物逆境之一，是限制农业生产的主要因素，由于水资源的相对不足及局部地区水资源的严重缺乏，导致利用工程措施解决盐渍化的可能性甚小，因而培育耐盐的农作物品种是未来农业发展较好途径，物种文库酵母菌株耐盐基因的筛选则属于耐盐基因工程的一种，由于基因工程的复杂繁琐化，使得目前对于耐盐基因的研究往往不够深入，为此现提出一种筛选物种文库酵母菌株耐盐基因的方法。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种筛选物种文库酵母菌株耐盐基因的方法，具备完善耐盐基因筛选的流程与步骤，促进耐盐基因筛选发展优点，解决了基因工程的复杂繁琐化，使得目前对于耐盐基因的研究往往不够深入的问题。

(二)技术方案

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种筛选物种文库酵母菌株耐盐基因的方法，包括以下材料：pYES2-NTB载体、酵母完全培养基与酵母缺陷型筛选培养基、贮备液、氯化钠溶液；

一种筛选物种文库酵母菌株耐盐基因的方法，包括以下步骤：

S100、文库构建；

S200、将空载质粒转化受体菌INVSc1；

S300、将物种文库转化受体菌INVSc1；

S400、盐浓度筛选；

S500、实验结果分析。

优选的，所述酵母完全培养基的组成为1％Yeast extract，2％Tryptone，2％Glucose,0.02％Adenine；所述贮备液为10×TE：0.1M Tris-HCl(pH7.5)，10mM EDTA，高压灭菌，10×LiAc：1M LiAc(pH7.5)，高压灭菌；所述氯化钠中加入配制好SG-U固体培养基，培养基中的NaCl终浓度为0、0.5、1.0、1.3、1.5、2.0M。

优选的，所述文库构建是根据之前已完成物种文库构建。

优选的，所述将空载质粒转化受体菌INVSc1包括以下步骤：

S201、酵母转化；

S202、酵母转化方法；

S203、阳性克隆PCR验证。

优选的，所述将物种文库转化受体菌INVSc1包括文库质粒转化。

优选的，所述实验结果分析包含文库库容、文库质量检测、盐浓度筛选、测序结果BLAST、回转验证。

与现有技术相比，本发明提供了一种筛选物种文库酵母菌株耐盐基因的方法，具备以下有益效果：