[发明专利]一种自驱动微流控芯片的制作方法及自驱动微流控芯片

权利要求书

1.一种自驱动微流控芯片的制作方法，其特征在于，包括抗体封存和抗体固定的步骤；其中，

所述抗体封存，包括荧光染料封存法或荧光微球封存法；

所述荧光染料封存法，包括将荧光染料通过化学反应标记在抗体上，并去除多余的荧光染料；然后，用透明的第一抗体封存液将荧光抗体稀释至所需要的浓度；最后，通过仪器定量将荧光抗体封存到自驱动微流控芯片的混合区上晾干；

所述荧光微球封存法，包括将抗体与荧光微球通过交联剂EDC/NHS进行反应；然后，用透明的第二抗体封存液将抗体荧光微球稀释至所需要的浓度；最后，通过仪器定量将荧光抗体封存到自驱动微流控芯片的混合区上晾干；

所述第一抗体封存液由海藻糖、BSA、聚乙烯吡咯烷酮、山梨醇和透明质酸钠通过HEPES缓冲液配制而成；所述第二抗体封存液由海藻糖、BSA、聚乙烯吡咯烷酮和山梨醇通过HEPES缓冲液配制而成；

所述抗体固定，包括EPI固定法或乳胶微球固定法；

所述EPI固定法，包括先将抗体与分子量为1w-100w的聚乙烯亚胺通过交联剂BS 3或DSS进行反应；然后，将反应后的混合溶液通过仪器定量将抗体固定到自驱动微流控芯片检测区的微柱上晾干；

所述乳胶微球固定法，包括先将抗体与乳胶微球通过交联剂EDC/NHS进行反应形成抗体微球结合物；将反应后的抗体微球结合物与透明质的固定液混合；最后，将混合后的溶液通过仪器定量将抗体固定到自驱动微流控芯片检测区的微柱上晾干；

所述固定液由羟乙基纤维素、透明质酸钠、海藻酸钠和聚乙烯醇中的任意一种通过HEPES缓冲液配制而成；或者分别配制后形成的两种及以上的组合物。

2.根据权利要求1所述的自驱动微流控芯片的制作方法，其特征在于，在所述EPI固定法中，获得反应后混合溶液的过程包括，

S11，将聚乙烯亚胺与抗体按质量比1∶3～1∶6混匀；

S12，将BS3加入到聚乙烯亚胺和抗体的混合液中混匀，其中BS3与聚乙烯亚胺的质量比为1∶10～1∶2；

S13，在37℃条件下反应2h～3h。

3.根据权利要求1所述的自驱动微流控芯片的制作方法，其特征在于，在乳胶微球固定法中，获得与固定液混合后溶液的过程包括，

S21，在37℃条件下将乳胶微球用交联剂EDC/NHS活化20min～40min，乳胶微球与EDC/NHS的质量比为100∶1～1∶1；

S22，将活化后的乳胶微球加入到抗体溶液中，并在37℃条件下反应2h-3h，乳胶微球与抗体的质量比为20∶1～5∶1；

S23，用冷冻离心机对抗体微球反应后的溶液进行离心分离，并在去除未标记的抗体后，加入HEPES缓冲液重悬抗体微球结合物；

S24，重复执行S23至少一次；

S25，再用冷冻离心机对抗体微球反应后的溶液进行离心分离，并在去除未标记的抗体后，加入所述固定液重悬抗体微球结合物。

4.根据权利要求3所述的自驱动微流控芯片的制作方法，其特征在于，在加入所述HEPES缓冲液的重悬过程中，以重悬后的质量百分比计，按混合液中抗体微球结合物的固含量为0.5％的比例加入所述HEPES缓冲液；在加入所述固定液的重悬过程中，以重悬后的质量百分比计，按混合液中抗体微球结合物的固含量为0.1％的比例加入所述固定液。

5.根据权利要求1所述的自驱动微流控芯片的制作方法，其特征在于，所述固定液，按质量百分比计分别，羟乙基纤维素占0.01％～1％、透明质酸钠占0.01％～0.1％、海藻酸钠占0.01％～0.1％、聚乙烯醇占0.01％～1％，其余均为HEPES缓冲液。

6.根据权利要求1～5中任意一项所述的自驱动微流控芯片的制作方法，其特征在于，在荧光染料封存法中，获得稀释后荧光抗体混合液的过程包括，

S31，将荧光染料与抗体按质量比1∶1～1∶10混合后，在37℃条件下反应20min～40min；

S32，通过透析或纯化的方式去除多余的荧光染料；

S33，用所述第一抗体封存液稀释到0.2mg/ml的抗体浓度。